斑马鱼动物模型的应用介绍 .pdfVIP

斑马鱼动物模型的应用 斑马鱼（Danio rerio ）属于辐鳍亚纲（Actinopterygii ）鲤科（Cyprinidae ）短担尼 鱼属（Danio ）的一种硬骨鱼，原产于南亚，是一种常见的热带观赏鱼，因其体侧具有斑 马一样暗蓝与银色相间的纹条而得名。 斑马鱼个体小，易于饲养，成体长 4-5cm ，雄鱼体修长，雌鱼体肥大。可在有限空间 里养殖相当大的群体，可满足样本需求量大的研究。斑马鱼发育迅速，在 28.5℃培养条件 下受精后约 40min 完成第一次有丝分裂，之后大约每隔 15min 分裂一次，24h 后主要器 官原基形成，相当于 28d 的人类胚胎，幼鱼孵出后约 3 个月达到性成熟。雌雄鱼通过调控 光周期控制 14:10 （光照:黑暗）产卵时间，成熟鱼每周可产卵一次，一尾雌鱼每次可产卵 100-300 枚。胚胎体外受精，体外发育，胚体透明 ，易于观察。受精卵直径约 1mm ，易 于进行显微注射和细胞移植等操作。 一、斑马鱼的品系 经过 30 多年的研究应用和系统发展 ，已有约 20 个斑马鱼品系 ，斑马鱼基因数据库 -ZFIN （ ）里有相关的资料可供查询和下载。目前研究中常用的斑马鱼野生 型品系主要为 AB 品系、Tuebingen （Tu ）品系、WIK 品系 ，斑马鱼基因组计划所用品系 是 Tu。AB 品系是实验室常用的斑马鱼品系 ，由单倍体细胞经早期加压法获得。Tu 品系斑 马鱼具有胚胎致死突变基因，用于基因组测序前敲除该致死突变基因。WIK 品系较 Tu 品 系具有更多的形态多样性。此外 ，还保存有 3000 多个突变品系和 100 多个转基因品系。 这些品系资源对于利用斑马鱼开展各种科学研究起着很大的推动作用。 二、斑马鱼突变品系的筛选 斑马鱼突变的方法主要有三种：已基亚硝脲（ENU ）化学诱导、γ或χ射线照射和插入 诱变。ENU 是一种 DNA 烃基化试剂，在生殖细胞减数分裂前诱导碱基对的替换，诱导产 生的突变率为 0.1%-0.2% ，涉及单个基因的突变。射线照射导致染色体大片段的缺失或染 色体重排，产生突变率达 1%。插入诱变是以逆转录病毒为载体，用显微注射法将目的基 因片段导入斑马鱼受精卵，整合到基因组中，干扰正常基因表达。射线照射产生的突变率 是 ENU 化学诱导的 10 倍，但由于突变涉及多个基因，突变的表型是受若干基因调控的结 果，不利于基因功能的分析，因此，ENU 化学诱导法是斑马鱼突变的主要方法。研究含有 纯合致死基因或隐形突变基因的突变表型时，可通过早期加压法（EP ）处理母本获得的单 倍体卵细胞获得二倍体纯合子。 三、斑马鱼作为人类疾病动物模型的生物学特性 斑马鱼在基因水平上 87％与人类同源 ，早期发育与人类极为相似 ，已成为研究相关疾 病基因的最佳模式生物。筛选斑马鱼胚胎或成鱼基因库中类似于人类致病或特定功能的基 因，构建进斑马鱼受精卵中，观察特定基因在斑马鱼胚胎发育过程所起作用。斑马鱼胚胎 发育是全透明的，可以全程观察并研究其发育状况。目前，斑马鱼模式生物的使用正逐渐 拓展和深入生命体的多种系统 （例如 ，神经系统、心血管系统、免疫系统等 ）的发育、功 能和疾病（例如 ，神经退行性疾病、心血管疾病、免疫系统疾病等 ）的研究中，并已用于 小分子化合物的规模新药筛选。 3.1 神经系统模型 斑马鱼研究表明 ，神经特异性钠离子通道大量表现在中枢和周边感觉神经系统 ，有效 调控神经的兴奋性 ，其基因表达调控及信号通路是神经学研究重点。 阿尔茨海默氏病（AD ）是一种由于大脑神经细胞死亡而造成的神经退行性疾病。AD 与淀粉样蛋白（Aβ）的过量表达沉积有关，Aβ是由 APP 连续切割产生，而早老素增强子 （pen-2 ）和前咽陷子（Aph-1 ）参与Aβ的产生。研究表明，将斑马鱼相关基因的表达进 行敲除，发现 Pen-2 与 P53 依赖型神经细胞的存活有重要作用。并且在构建绿色荧光蛋白 （GFP ）转基因斑马鱼品系中，发现在 2-3 月龄转基因斑马鱼大脑中，广泛大量表达 GFP-APP。这些说明斑马鱼神经系统发育在进化上和人类的保守关系。 帕金森氏病（PD ）与多巴胺能（DA ）通路的破坏有关。神经毒物 MPTP 对人类中脑 多巴胺能神经细胞的损伤现象与 PD 类似。研究者将多巴胺转运蛋白抑制物和 MPTP 共同 作用于斑马鱼幼鱼，发现这些药物具有保护多巴胺能神经细胞的作用。 3.2 心血管系统模型 斑马鱼胚胎期和幼鱼期