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大黄素通过激活自噬对TGF-pl诱导的HK-2细胞纤维化因子的影响 窦芳;丁一;姚敏娜;简宇凡;王文军;赵先;王靖雯;文爱东【摘要】目的研究大黄素对TGF-P1刺激的人肾小管上皮细胞(HK-2)损伤的保护作用,并探讨其可能的机制.方法TGF-P1刺激HK-2细胞24h后，收集细胞，用于免疫荧光、免疫印迹和实时荧光定量PCR(qPCR)分析.qPCR法分别检测肾纤维化蛋白TGF-p1、纤连蛋白(FN),以及自噬蛋白LC3、Beclin-1mRNA的表达;Westernblot法分别检测TGF-P1.I型胶原蛋白(COLI)、LC3和Beclin-1的蛋白表达；免疫荧光检测肾纤维化相关因子FN在HK-2细胞模型中的表达结果qPCR、Westernblot和免疫荧光实验结果表明，与Control组比较,TGF-1组细胞肾纤维化相关蛋白TGF-B1、COLI、FN表达升高启噬标志蛋白LC3和Beclin-1的表达也升高.qPCR、Westernblot和免疫荧光实验结果表明，与TGF-1组比较,TGF-B1+大黄素组肾纤维化相关蛋白TGF-B1、COLI、FN表达降低,LC3和Beclin-1的表达仍然增加结论大黄素干预后，促进TGF-P1细胞模型自噬增加，改善肾纤维化的程度，保护细胞模型损伤. 【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷)，期】2018(034)011【总页数】5页(P1555-1559)【关键词】慢性肾脏病;大黄素;纤维化;TGF-B1;HK-2启噬【作者】窦芳;丁一;姚敏娜;简宇凡;王文军;赵先;王靖雯;文爱东 【作者单位】空军军医大学西京医院药剂科，陕西西安710032；空军军医大学西京医院药剂科，陕西西安710032；空军军医大学西京医院药剂科，陕西西安710032;空军军医大学西京医院药剂科，陕西西安710032；空军军医大学西京医院药剂科，陕西西安710032；空军军医大学西京医院药剂科，陕西西安710032；空军军医大学西京医院药剂科，陕西西安710032；空军军医大学西京医院药剂科，陕西西安710032【正文语种】中文【中图分类】R284.1;R322.61;R329.24;R692.022;R977.6慢性肾脏病(chronickidneydisease，CKD)已成为世界公共卫生关注的重大问题，我国CKD的发病率已高达10.8%，患病人群数量接近1.2亿。肾间质纤维化(renalinterstitialfibrosis，RIF)是各种病因导致的CKD进展至终末期肾病的共同病理机制［1］。RIF被认为是CKD发展的关键因素，造成正常肾单位的丢失，导致肾小球硬化和RIF，最终可能造成肾功能丧失等严重后果。自噬是细胞分解自身构成成分的一种生理现象，广泛存在于真核细胞的蛋白降解过程中，它可将损伤的或过剩的细胞构成成分分解成基本的活性成分，使之可再次得到利用［2］。自噬对肾纤维化的作用和机制引起科研人员极大的兴趣［3］。Kim等［4］研究发现，Akt/mTOR信号通路激活自噬，自噬在肾小管损伤和肾纤维化方面起到保护作用。大黄素(emodin，EM)是中药大黄蒽醌类物质，Ma等［5］研究发现，大黄中大黄蒽醌类活性成分EM可改善肾损伤功能。本文通过转化生长因子P1(transforminggrowthfactorB1,TGF-1)刺激人肾小管上皮细胞(HK-2)模型［6］，研究EM对模型细胞形态改变，肾纤维化标志蛋白TGF-P1.I型胶原蛋白(collagenI,COLI)、纤连蛋白(fibronectin,FN),自噬标志性蛋白LC3、Beclin-1表达的影响，探讨EM保护肾纤维化的机制。 1材料与方法1.1细胞株HK-2细胞购自中科院上海细胞库，用含10%胎牛血清的DMEM/F12（1:1）培养基培养，其中加入100kU-L-1的青霉素和链霉素双抗，在37°C、5%CO2培养箱中培养［10］。 1.2药物与试剂EM（纯度大于98%），购自中国食品药品检定研究院，溶于含10%胎牛血清的DMEM/F12培养液。TGF-P1细胞因子（Cat:100-21，美国Peprotech公司）；兔抗COLI多克隆抗体（Proteintech公司）；兔抗LC3单克隆抗体、兔抗Beclin-1多克隆抗体（美国CST公司）；鼠抗p-actin单克隆抗体（美国SantaCruz公司）;CCK-8试剂盒（日本DojindoLaboratories）。 1.3仪器371型CO2培养箱（美国Thermo公司）；IX71型倒置显微镜旧本Olympus公司）；C2+激光扫描共聚焦旧本Nikon公司）；Powerpac电泳仪、CFX96TMReal-TimePCRDetectionSystem、ChemiDocTMXRS型化学发光成像系统（美国