色谱分离技术课件.pptVIP

第七章色谱分离技术 ; 随着科学的进步，某些关系到人们生命安全的生物药品，尤其是注射药品和生物工程产品等，都需要高度纯化。但是，经典的分离方法（如萃取、结晶等）很难满足需要。 色谱法应运而生。; 色谱分离是一组相关技术的总称，又叫做色谱法、层析法，是一种高效而有用的生物分离技术。 是产品的最后纯化工序（精制），即在用色谱纯化之前需要经过其他方法进行提取和初步纯化。 近40年来，色谱技术已成为生物大分子分离和纯化技术中极重要的组成部分。 胰岛素、干扰素、疫苗、抗凝血因子、生长激素等。;概述;色谱法的发展历史;色谱法起过关键作用的诺贝尔奖研究工作;色谱分离基本原理： 使用外力使含有样品的流动相（气体、液体或超临界流体）通过一固定于柱或平板上、与流动相互不相溶的固定相表面。处于柱起始端的样品中各组份与两相进行不同程度的作用。与固定相作用强的组份随流动相流出的速度慢，而与固定相作用弱的组份随流动相流出的速度快。由于流出的速度的差异，使得混合组份最终形成各个组份的“带(band)”或“区(zone)”，对依次流出的各个组份物质可分别进行定性、定量分析。 ; ;色谱分类方法;按流动相，可分为： 气相色谱法 液相色谱法 超临界色谱法 按固定相物态，气相色谱法可分为： 气固色谱法 气液色谱法 按流动相物态，液相色谱法可分为： 液固色谱法 液液色谱法;色谱分离技术;按色谱动力学过 程，可分为： 洗脱色谱 顶替色谱 迎头色谱;按组份在固定相上的物理化学原理，分为： 吸附色谱：不同组份在固定相的吸附作用不同； 分配色谱：不同组份在固定相上的溶解能力不同； 离子交换色谱：不同组份在固定相（离子交换 剂）上的亲和力不同； 凝胶色谱:（尺寸排阻色谱）：不同尺寸分子在固 定相上的渗透作用； ;色谱法的特点;; 一、概述; 2.色谱法的特点; 流动相流经固定相时，由于物质在两相间的分配情况不同，经过多次差别分配而达到分离；或者说，易分配于固定相中的物质移动速度慢，易分配于流动相中的物质移动速度快，??而逐步分离。; （2）基本特点： ① 分离效率高。其效率是所有分离纯化技术中最高的，这种高效的分离尤其适于极复杂混合物。 ② 应用范围广。（非）极性、（非）离子型、小分子和大分子、无机和有机及生物活性物质、热（不）稳定化合物；尤其是对生物大分子的分离，其他方法无法取代。 ③ 选择性强。可变参数很多：不同的色谱分离方法、固定相和流动相、操作条件。 ④ 设备简单，操作方便，且不含强烈的操作条件，因而不容易使物质变性，特别适于不稳定的大分子有机化合物。; 缺点： 处理量小、操作周期长、不能连续操作，因此主要用于实验室，工业生产上应用较少。; 3.色谱法的分类; 4.色谱分离方法的选择; 色谱分离方法的选择依据： ① 目的产物的分子结构、物理化学性质及相对分子质量； ② 主要杂质，特别是分子结构、大小和理化特性与目的产物相近的杂质成分与含量； ③ 目的产物在色谱分离过程中的生理活性的稳定性。; 二、吸附色谱法; （一）基本原理 溶液中某组分的分子在运动中碰到一个固体表面时，分子会贴在固体表面上，发生吸附作用。 1.发生吸附作用的原理： 固体表面分子（或原子）与固体内部分子（或原子）所处的状态不同： 固体内部分子（或原子）受临近四周分子的作用力是对称的，作用力总和为零，即彼此互相抵消，故分子处于平衡状态。 界面上的分子所受的力不对称，作用力总和不等于零，合力指向固体内部。; 2.吸附的类型： ;物理吸附 化学吸附; 交换吸附： 吸附剂表面如果由极性分子或离子组成，则会吸引溶液中带相反电荷的离子形成双电层，同时放出等物质的量的离子，发生离子交换。 离子的电荷是决定因素，离子所带电荷越多，在吸附剂表面的相反电荷点上的吸附力越强。 电荷相同的离子，水化半径越小，越容易被吸附。; 3.常用的吸附剂： ;;（2）分类; 5.吸附薄层色谱法 （thin layer chromatography, TLC） 薄层色谱法：将吸附剂或支持剂均匀的铺在玻璃板上，铺成一薄层，然后把要分离的样品点到薄层的起始线上，用合适的溶剂展开，最后使样品中各组分得到分离。; （1）原理： 利用混合物中各组分的物理化学性质的差异，在层析过程中，在不相溶的两相中分布不同，从而达到分离的目的。; 将待分离的样品溶液点在薄层板的一端，在密闭的容器中用适宜的溶剂（展开剂）展开。; 当溶剂流过时，不同物质在吸附剂和展开剂之间发生连