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H3N2亚型犬流感病毒NP基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立的中期报告 一、研究背景和目的 犬流感是一种由犬流感病毒引起的呼吸道传染病，能够引起犬只的咳嗽、流鼻涕、发热等症状，严重时甚至导致死亡。目前已知犬流感病毒有H3N8和H3N2两种亚型，其中H3N2亚型病毒极易传播，近年来在欧美地区已导致多起大规模的犬流感疫情。因此，对H3N2亚型犬流感病毒的研究具有重要意义。 本研究旨在通过原核表达技术制备H3N2亚型犬流感病毒NP基因的表达蛋白并建立间接ELISA检测方法，为该病毒的防控提供基础支撑。 二、材料与方法 1. 实验材料 （1）pET-32a(+)载体（Novagen公司）； （2）BL21（DE3）感受态菌株（TransGen Biotech公司）； （3）chNP基因克隆载体（自建）； （4）His标签蛋白纯化试剂盒（CWBIO公司）； （5）H3N2亚型犬流感病毒阳性血清（自建）。 2. 实验方法 （1）基因克隆：将H3N2亚型犬流感病毒中的NP基因扩增至载体中，构建chNP基因表达载体。 （2）原核表达：将构建好的表达载体转化至BL21（DE3）感受态菌株中，用IPTG诱导表达，通过His标签纯化提取表达蛋白。 （3）间接ELISA检测：利用提取的表达蛋白做为抗原，制备H3N2亚型犬流感病毒的检测板。接着，用病毒阳性血清及实验室健康犬的血清分别做为阳性和阴性