小菜蛾中肠丝氨酸蛋白酶基因的克隆、转录及其酶活的研究的中期报告.docxVIP

小菜蛾中肠丝氨酸蛋白酶基因的克隆、转录及其酶活的研究的中期报告 小菜蛾（Plutella xylostella）是危害十分严重的农业害虫，是全世界范围内许多经济作物的主要害虫之一。中肠丝氨酸蛋白酶（Serine protease）是小菜蛾幼虫生长发育和繁殖生殖等生命活动中的关键酶类，对小菜蛾的生存和繁殖至关重要。本研究旨在克隆小菜蛾中肠丝氨酸蛋白酶基因，研究其转录和酶活。 一、材料与方法 1.实验材料 本实验采用小菜蛾幼虫作为实验材料。 2.克隆小菜蛾中肠丝氨酸蛋白酶基因 根据GenBank数据库中小菜蛾的Serine protease基因序列设计引物。扩增反应条件为：96℃预变性5min，96℃变性1min，49℃退火30s，72℃延伸1min，共循环30次。扩增产物经酶切、电泳、测序等分子生物学方法进行鉴定。 3.研究小菜蛾中肠丝氨酸蛋白酶基因的转录 利用RT-PCR技术，提取小菜蛾中肠总RNA，逆转录成cDNA并扩增。扩增反应条件与上述相同。扩增产物经酶切、电泳、测序等分子生物学方法进行鉴定。 4.研究小菜蛾中肠丝氨酸蛋白酶的酶活 采用法国科技公司原装生产的试剂盒在细胞匀浆中检测小菜蛾中肠丝氨酸蛋白酶的活性。活性值以OD450值表示，用Excel软件进行数据处理。 二、结果与分析 1.克隆得到小菜蛾中肠丝氨酸蛋白酶基因序列 通过PCR反应、酶切、测序等一系列分子生物学方法，成