人CD4胞外区及人和小鼠MHCⅡ分子胞外区的表达及活性鉴定的中期报告.docxVIP

人CD4胞外区及人和小鼠MHCⅡ分子胞外区的表达及活性鉴定的中期报告 本研究的中期目标是在人CD4胞外区和人、小鼠MHCⅡ分子胞外区中鉴定表达及活性。为达成该目标，我们进行了分子克隆、蛋白表达、纯化及活性鉴定实验。 首先，我们从人和小鼠的基因组DNA中扩增了CD4和MHCⅡ分子的胞外区序列。通过限制性内切酶酶切和连接酶连接，将这些序列克隆进表达载体中。经验证后，我们将这些载体转化到大肠杆菌中进行表达。 蛋白表达后，我们使用亲和层析柱纯化了CD4和MHCⅡ分子胞外区蛋白。纯化后的蛋白经SDS电泳和Western blot检测，表明蛋白已被充分纯化。进一步用圆二色谱检测蛋白的二级结构，结果表明CD4和MHCⅡ分子蛋白都呈现典型的α螺旋和β折叠结构。最后，我们还对蛋白进行了质谱分析，证实了纯化蛋白的正确性。 下一步，我们将根据先前报道的方法，对CD4和MHCⅡ分子胞外区的免疫活性进行评价。具体来说，我们将使用流式细胞术检测这些蛋白与相应抗体的结合情况。 总之，我们已经成功地克隆、表达、纯化了人CD4胞外区及人、小鼠MHCⅡ分子胞外区蛋白，并将进行进一步的免疫活性鉴定。这些工作将为我们的下一步研究奠定坚实基础。