常规PCR实验演示文稿.pptVIP

本文档共33页；当前第1页；编辑于星期一\16点58分 掌握： 1、PCR的基本操作方法。 2、琼脂糖凝胶电泳检测DNA的基本原理和方法。 理解： 1、PCR仪的使用方法。 了解： 1、PCR体外扩增的原理及其引物设计原则。 2、扩增过程中各因素对扩增结果的影响。 教学目的： 本文档共33页；当前第2页；编辑于星期一\16点58分 1、PCR反应体系的建立。 2、琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。 教学重点： 教学难点： 1、PCR反应程序的设计方法。 本文档共33页；当前第3页；编辑于星期一\16点58分 一、基本原理 聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）： 体外DNA酶促扩增技术，能特异高效地在体外扩增目的DNA片段。 本文档共33页；当前第4页；编辑于星期一\16点58分 PCR反应的基本步骤 变性 94?C 双链DNA模板被加热变性成两条单链 退火 45~60 ?C （Tm-5?C） 寡聚核苷酸引物按碱基互补配对原则与单链模板DNA特异结合 延伸 72?C DNA聚合酶作用下，以引物为起始，合成与模板DNA互补的新链 本文档共33页；当前第5页；编辑于星期一\16点58分 Cycle 2 5? 5? 5? 5? 5? Primer 1 5? Primer 2 Cycle 1