鸭瘟病毒强毒株AV1221株gH基因的克隆与截短型gH基因的原核表达的中期报告.docxVIP

鸭瘟病毒强毒株AV1221株gH基因的克隆与截短型gH基因的原核表达的中期报告 近年来，鸭瘟病毒在中国鸭子养殖业中引起了广泛关注。研究表明，病毒表面的gH蛋白是诱导宿主细胞对病毒感染产生免疫反应的重要抗原。因此，对鸭瘟病毒的gH基因进行克隆和表达研究，对病毒学研究和疫苗开发具有重要意义。 本研究从我国野生鸭瘟病毒强毒株AV1221中提取RNA，采用RT-PCR方法克隆了gH基因全长（1767bp）和截短型（1023bp）两个片段，并将其连接到pET-28a载体中，构建表达载体pET-28a-gH和pET-28a-gHΔTM。经测序验证，克隆序列与已公布gH序列一致。 进一步进行原核表达实验，在BL21（DE3）菌株中诱导表达蛋白。通过SDS和Western blotting检测结果显示，经诱导表达后，pET-28a-gH和pET-28a-gHΔTM均能表达出目的蛋白，其中gH蛋白的分子量为~70 kDa，gHΔTM蛋白的分子量为~47 kDa。Western blotting结果表明，表达的gH和gHΔTM蛋白能够与特异性免疫血清反应，进一步验证了克隆和表达的准确性。 总之，本研究成功克隆并表达了鸭瘟病毒AV1221株的gH基因全长和截短型。中期结果表明，构建的表达载体能够在大肠杆菌中成功表达出目的蛋白，为后续研究奠定了基础。