齐鲁医学酶的提取与分离纯化(2).pptVIP

第三章 酶的提取与分离纯化;一、电泳的基本理论 1. 原理:; 影响迁移率的因素： 颗粒性质：Q越大、r越小、形状越接近球形，v 越快。 电场强度：E越高，v越快。 电泳液： pH值：离pI越远，v越快。（用buffer保持恒定） 离子强度：离子强度越高，v 越低。 通常，缓冲液离子强度在0.02-0.2之间。 电 渗：在电场中，液体对于固体支持物的相对移动。 应避免用高电渗物质作支持介质。; 自由界面电泳：又称移动界面电泳，指在没有支持介质的溶液中进行的电泳。 区带电泳:指有支持介质的电泳，待分离物质在支持介质上分离成若干区带。 支持介质的作用:防止电泳过程中的对流和扩散。;按支持介质种类的不同，区带电泳可分为： ①纸电泳：用滤纸作支持介质，用于核苷酸定性定量分析。 ②醋酸纤维素薄膜电泳：常用于分析血清蛋白、胎盘球蛋白，优点是简便迅速，便于保存照相，比纸电泳分辨率高。 以上两种类型的电泳，由于介质的孔径度大，没有分子筛效应，主要靠被分离物的电荷多少进行分离。 ;③琼脂糖凝胶电泳： 一般用于核酸的分离分析。琼脂糖凝胶孔径度较大，对大部分蛋白质只有很小的分子筛效应。 ④聚丙烯酰胺凝胶电泳：