实验蛋白质的等电点测定和沉淀反应.pptxVIP

实验二、蛋白质 等电点测定及沉淀反应 一、实验目的 1、了解蛋白质的两性解离性质 2、学习测定蛋白质等电点的一种方法 3、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。 4、了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。 5、了解蛋白质变性与沉淀的关系。 二、实验原理 • 蛋白质是两性电解质。在蛋白质溶液中存在下 列平衡： • 本实验通过观察不同pH溶液中的溶解度以测 定酪蛋白的等电点。用醋酸与醋酸钠(醋酸 钠混合在酪蛋白溶液中)配制各种不同pH值 的缓冲液。向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后， 沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的 等电点。 • 在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成 水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体 颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白 质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。 蛋白质的沉淀反应可分为 两类。 v不可逆沉淀反应 此时蛋白质分子内部结构发生重大改变， 蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂 中。加热引起的蛋白质沉淀与凝固，蛋白 质与重金属离子或某些有机酸的反应都属 于此类。 蛋白质变性后，有时由于维持溶液 稳定的条件仍然存在(如电荷)，并不 析出。因此变性蛋白质并不一定都表现 为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变 性。 三、试剂器材 1、实验材料： 鸡蛋清 牛乳 2、仪器设备： • 水浴锅 • 温度计 • 锥形瓶 • 100mL容量瓶 • 吸管 • 试管及试管架 • 1.