核酸探针技术及应用.docx

word. word. 核酸探针技术及应用 基因检测技术的发展，使对某些疾病的诊断达到了特异性强、敏感性高及简便快速的目 的。近年来各种血清学方法发展很快，但血清学方法主要是测抗体，是间接的证据随着分子 生物学的发展，应用DNA—DNA杂交建立了核酸探针(Probe)技术，该技术是目前基因检测最 常用的方法， 目前已成为诊断各种感染性疾病，恶性肿瘤，遗传病，检测抗生紊的耐药性， 法医学鉴定及从分子水平上研究发病机制与流行病学规律等方面的一种重要手段。本文主要 介绍了核酸探针技术的原理，核酸分子杂交方法及核酸探针的应用等方面。 一、核酸探针技术的原理 DNA 或RNA 片段能识别特定序列基因的DNA 片段，能与互补的核苷酸序列特异结合，这种用同位素非同位素标记的单链DNA片段即为核酸探针。 核酸探针技术是将双链DNA 经加热或硷处理，使硷基对间的氢链被破坏而变性，解开成两条互补的单链。它们在一定温度和中性盐溶液条件下，又可按A—T，G—C碱基配对的原则 重新组合成双链为复性。这种重组合只是在两股DNA是互补(同源)或部分互补(部分同源)的 条件下才能实现。正是由于双链DNA的这种可解离与重组合的性质，才可用一条已知的单链DNA，用放射性同位素或其他方法标记后制备成核酸探针，与另一条固定在硝酸纤维素滤膜上的变性单链DNA进行杂交，(另一条DNA链与核酸探针是配对碱基，称为靶)再