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lc-esi-ms法测定大鼠胆汁、尿液和粪便中苯环喹溴铵的浓度 苯环溴化铵的化学名为3-{（2-环戊二-2-硝基二-苯基）二氧基。-1-甲基环磺酰胺-1-硝基环磺酰胺-2-环磺酰胺。辛烷[3-{（2-cyclopent-2-hydrocy-2phenyl）、环磷酰胺-1-azabicyclo[2-2-a]。一般称为苯环溴化铵，以下简称bcqb（图1a）。它是一种新的抗胆碱能化合物,药理作用基本与异丙基阿托品一致,但对中枢胆碱能受体无作用,因此不会造成心动过速或尿潴留等不良反应,是一个理想的抗鼻炎候选药。与异丙阿托品相比,适应人群应该更广,临床上拟用于治疗常年性过敏性鼻炎、常年性非过敏性鼻炎和各种急性鼻炎(如感冒引起的鼻腔粘膜分泌过度症状等)。BCQB已经申请了中国专利和国际专利。本实验建立了LC-ESI-MS法测定大鼠胆汁、尿液和粪便中BCQB的浓度,首次报告了其不同排泄途径的研究结果,为该药在大鼠体内的代谢转化过程和临床用药提供参考。 1 材料和方法 1.1 -乙基-溴化-1-氮杂双环 BCQB对照品由北京世桥生物制药有限公司提供,批号:031120,纯度为 99.5%。内标:1-乙基-苯环喹溴铵,化学名:3-{(2-环戊基-2-羟基-2-苯基)乙氧基}-1-乙基-溴化-1-氮杂双环{2,2,2}辛烷)(图1B),由北京世桥生物制药有限公司提供,批号:041205,纯度为 98.0%;苯扎氯铵(吉尔灭,辅料),由北京世桥生物制药有限公司提供;3 mL 规格的C18固相萃取小柱(SupelcleanTM LC-18 SPE Tube, SUPELCO, Bellefonte, PA, USA);实验用水为去离子水;甲醇(色谱纯,Merck Company,Darmstadt Germany);其它试剂均为市售分析纯。 1.2 仪器、色谱传播 1100 LC-MS SL联用仪,含:双高压泵、自动进样器、柱温箱、电喷雾离子化接口、四极杆质谱检测器。色谱工作站:Agilent ChemStation (10.02A);XHF-1高速分散器(上海金达生化仪器有限公司);XW-80A旋涡混合器(上海医科大学仪器厂);80-2离心机(上海手术器械厂);高速台式离心机1612-1型高速离心机(上海金达生化仪器有限公司)。 1.3 i试验 SD大鼠,♂♀各半,体重246～358 g(胆汁排泄试验)、195～210 g(尿液和粪便排泄试验),II 级,由南京医科大学实验动物中心提供,合格证号:SCXK(苏)2002-0031。 1.4 试验药物的制备 精确称取一定量的BCQB和辅料苯扎氯铵,加入生理盐水至全部溶解后,用HCl调pH至4～6,再用生理盐水稀释至所需浓度,供动物给药用。 1.5 不同给药剂量和药物浓度对大鼠脏器脏器和粪便泄漏的影响 (1)胆汁排泄:大鼠8只,♂♀各半。给药前禁食但可自由饮水 10 h 后,用乌拉坦麻醉(1.25 g/kg,i.p.),仰位固定,做胆管插管引流术。收集给药前胆汁作为空白对照,然后1次鼻腔给予 3.0 mg/kg BCQB(给药剂型为BCQB滴鼻剂,规格为 30 mg/mL)。每只大鼠按体重不同给药体积亦不同,每个鼻孔给药体积为 10 μL 左右,给药方法是用注射器插入鼻孔3～5 mm 处注入药液。收集给药后0～2、2～4、4～6、6～8、8～12、12～24 h 的胆汁,按拟定方法测定胆汁中药物的浓度。(2)尿液和粪便排泄试验:大鼠8只,♂♀各半,置于代谢笼中。给药前禁食但可自由饮水 10 h 后,收集给药前的尿液和粪便作为空白对照。大鼠用乙醚浅麻后1次鼻腔给予 3.0 mg/kg BCQB,给药剂型和方法与胆汁排泄试验相同,收集给药后0～4、4～8、8～12、12～24、24～48、48～72、72～120 h 尿液,准确测量体积,经适当稀释后测定;收集给药后0～12、12～24、24～48、48～72、72～120 h 粪便,加定量生理盐水制成匀浆。按拟定方法测定尿液和粪便中药物的浓度。 1.6 lc-esi-ms的测量条件 1.6.1 hplc测定条件 流动相:甲醇-(含 40 mmol/L 醋酸铵和1%甲酸)水溶液(70:30,v/v);流速:0.8 mL/min;色谱柱:Lichrospher C18(dp 5 μm,4.6～250 mm ID,江苏汉邦科技股份有限公司);柱温:25 ℃。 1.6.2 hplc测定条件 流动相:甲醇-(含 40 mmol/L 醋酸铵和1%甲酸)水溶液(75:25,v/v);流速:1.0 mL/min;色谱柱:Lichrospher C18(dp 5 μm,4.6～250 mm ID,江苏汉邦科技股份有限公司);柱温:25 ℃。 1.6.3 辅助电喷雾离子化