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MOV10抑制LINE-1转座活性机制初探的中期报告 中期报告： 1. 研究背景和目的： LINE-1（L1）是人类基因组中最活跃和最具破坏性的转座子，其异常激活会导致遗传疾病、癌症和神经退行性疾病。MOV10是一个RNA结合蛋白，可以抑制L1的转座活性。然而，MOV10抑制L1的具体机制尚不清楚。本研究旨在探索MOV10抑制L1的分子机制，以期为相关疾病的治疗和预防提供新的思路和靶点。 2. 研究进展： 1）构建了MOV10 siRNA建立的HEK293细胞株； 2）采用实时PCR和Western blot分析了MOV10 siRNA对HEK293细胞MOV10表达的抑制作用，并筛选出MOV10 siRNA转染48小时是抑制率最高的方案； 3）采用L1转座子活性检测系统，观察MOV10 siRNA对L1转座活性的影响； 4）运用病毒载体转染实验，将MOV10基因重组在pcDNA3.1及EGFP表达载体中，建立带有MOV10基因的HEK293细胞株，并分别采用实时PCR和Western blot检测MOV10在各个细胞系中的表达情况； 5）运用荧光激活细胞排序技术，采用GFP作为标记，筛选出MOV10与L1的相互作用蛋白。 3. 下一步的计划： 1）通过RNA序列分析，筛选出MOV10的结合位点； 2）利用CHIP-seq等技术，进一步鉴定MOV10对基因表达的影响； 3）分离MOV10介导的L1 RNA-RNA相互作用复合物，并鉴定其成员； 4）在MOV10敲除和过表达的细胞中，测量L1转座和退转座的活性，并进一步探讨MOV10调节L1的分子机制； 5）分析MOV10在人类胚胎中的表达情况，探讨其在胚胎发育过程中的作用。