细胞工程植物组织器官培养技术.pptxVIP

细胞工程植物组织器官培养技术;第四章 植物组织器官培养技术;一 植物脱毒与离体无性繁殖技术 二 花药与花粉培养 三 植物胚胎培养 ;一 植物脱毒与离体无性繁殖技术;意义;离体繁殖周期短(1～3个月),不受季节限制,因此繁殖系数高(几十至几百倍),繁殖速度就是任何其她方法所不能比拟得,所以通常将组织培养繁殖称之为快繁(rapid clonal propagation)。;目前受病毒为害严重得作物有: ①大田作物 马铃薯、甘薯、甘蔗和烟草。 ②蔬菜 白菜、大蒜、葱、番茄和萝卜。 ③果树 柑橘、苹果、草莓和香蕉。 ④花卉 香石竹、各种菊花、天竺葵和紫罗兰等。 ;对于那些以块根、块茎、鳞茎为繁殖器官得作物来讲,每年相当一部分产品要用作留种。如: ①大蒜 留种量占产量得1/5～1/8。 ②马铃薯 留种量占产量得1/10。 ③贝母 留种量占产量得1/3。 ;常规营养繁殖器官多就是块根、块茎、鳞茎、枝条等,体积大、含水量高,包装、运输十分不便,特别就是远距离调运损失很大。 离体繁殖得种苗体积小,一般自带容器,很容易携带,运输方便。 -以马铃薯为例来讲,按1亩地4000株计算,常规种薯4000个重约200kg,若用试管薯4000个则只有2kg。;基本原理 技术规程 影响脱毒效果得因素;茎尖脱毒就是控制植物病毒得有效途径 －药物防治病毒效率低 －抗病毒育种步履艰难 －组织培养得高效隔离防止了病毒得再侵染 脱毒－保持种性－快繁已就是一个系统技术,在许多无性繁殖作物得种苗生产上均形成了自己得体系。;12;病毒在植物体内得分布具有不均匀性 －1934年,White发现烟草花叶病毒(TMV)在烟草根中分布就是不均匀得,越靠根尖区病毒含量越低,在根尖得顶端(生长点)不含病毒。 －1949年,Limaset和Cornuet根据White得发现推测,病毒在烟草茎中得分布也可能存在与根部组织同样得情况,茎尖分生组织也应不带病毒。 －1952年,Morel和Martin首先利用茎尖分生组织培养获得了大丽花和马铃薯无病毒苗,同时建立了茎尖脱毒得组织培养技术体系。;能量竞争 传导抑制 激素抑制 酶缺乏 抑制因子;(1)被脱毒植物携带病毒得诊断 (2)母体材料得选择和预处理 (3)茎尖分生组织培养再生植株 (4)脱毒效果检测 (5)脱??苗得保存与繁殖;(1)被脱毒植物携带病毒得诊断 ;(2)母体材料得选择和预处理;外植体预处理:;?香石竹在38℃～40℃条件下经两个月处理可除去全部病毒。 ?菊花在35℃～38℃得条件下处理60天可使病毒失活。 ?马铃薯在37℃条件下处理10～20天能除去卷叶病毒。 柑橘－速衰病毒/黄化病毒40℃/30℃条件下处理7～12周。 鳞皮病毒需要在40℃/30℃条件下处理8周。 啐叶病毒需要在50℃条件下处理3～22小时。 洲青果病毒在50℃条件下处理30～40分钟。;(3)茎尖分生组织培养再生植株;－外植体消毒 在切取外植体之前茎芽进行表面消毒。叶片包被严紧得芽,如菊花、兰花,只须75%酒精中浸蘸一下,而叶片包被松散得芽,如香石竹、蒜和马铃薯等,则用0、1%次氯酸钠或升汞表面消毒10分钟。对于这些消毒方法,工作中应灵活运用,如在大蒜茎尖培养时,可将小鳞茎在75%酒精中浸蘸一下,再用灯火烧掉酒精然后解剖出无菌茎芽。 ; ⅰ 把茎芽置于解剖镜下(8～40倍),一只手用镊子将其按住另一只手用解剖针将叶片和叶原基剥掉,解剖针要常蘸入90%酒精,并用火焰灼烧以进行消毒。但应注意解剖针得冷却,可蘸入无菌水进行冷却; ⅱ 当一个闪亮半圆球得顶端分生组织充分暴露出来之后,用解剖刀片将分生组织切下来,为提高成活率,可带1-2枚幼叶然后将其接到培养基上; ⅲ 接种时确保微茎尖不与其她物体接触,用解剖针接种即可。剥离茎尖时,应尽快接种,茎尖暴露时间应当越短越好,以防茎尖变干。可在一个衬有无菌湿滤纸得培养皿内进行操作,有助于防止茎尖变干。 ;shoot tip shoot apex apical meristem apical dome;－茎尖培养;;指示植物鉴定(indicator test plants) 所谓指示植物就是指具有能够辨别某种病毒得专化性症状得寄主植物。 血清鉴定(serologic test) 试管沉淀反应;免疫双扩散;酶联免疫吸附测定(ELISA)。 ;指示植物鉴定(indicator test plants) a、摩擦接种法: －取培养植株得叶片置于研钵中,加入少量得水和等量得0、1mol/L磷酸缓冲液(pH 7、0),磨成匀奖; －将其涂抹在指示植株叶片上并在叶片上撒上金刚砂,通过轻轻摩擦使汁浸入