PCV2 Cap蛋白在毕赤酵母中的分泌表达及小鼠免疫试验的中期报告.docxVIP

PCV2 Cap蛋白在毕赤酵母中的分泌表达及小鼠免疫试验的中期报告 本次研究旨在通过毕赤酵母（Pichia pastoris）表达系统，实现猪圆环病毒（PCV2） Cap蛋白的高效表达和分泌，并进一步进行小鼠免疫试验，验证其在动物体内的免疫原性。 首先，我们利用基因重组技术将 PCV2 Cap 基因克隆到了 pPICZαA 载体中，并将载体转化到毕赤酵母 X33 亚型中。通过测序鉴定和蛋白质印迹分析，确认了重组表达载体 pPICZαA-Cap 的建立和毕赤酵母对 Cap 蛋白的表达。进一步运用培养条件的优化，通过高密度发酵表达，获得了大量的 PCV2 Cap 蛋白。 随后，我们对 Cap 蛋白的纯化和鉴定进行了深入研究。利用亲和层析和离子交换层析技术成功纯化了 Cap 蛋白，得到了较高纯度的重组蛋白。并通过 Western blot 和质谱分析证实其分子量和序列正确性。 最后，我们将纯化后的 PCV2 Cap 蛋白用于小鼠免疫试验。在完成初步安全性评估后，将 PCV2 Cap 蛋白分别注射到小鼠中。通过免疫学检测和病毒攻击实验，证明了表达的 Cap 蛋白在小鼠体内具有良好的免疫原性和免疫保护效果。 综上，我们成功地在毕赤酵母中表达和纯化了 PCV2 Cap 蛋白，并证实了其在小鼠免疫试验中的免疫原性和免疫保护效果。这为 PCV2 的免疫治疗和疫苗研发提供了有力的支持。