质粒提取过程中的常见问题.docxVIP

,. 1、质粒提取不可功的原由 （1）裂解时间太长。加入溶液P2后裂解时间不该超出5分钟。 2）吸附时间不够 3）溶解时间不够 4）大肠杆菌老化。建议涂布平板培育后。从头精选新菌落进行液体培育。 （5）质粒拷贝数低。因为使用低拷贝数载体惹起的质粒DNA提取量低，可改换详细同样 功能的高拷贝数载体。 （6）菌体中无质粒。有些质粒自己不可以在某些菌种中稳固存在，经多次转接后有可能造成 质粒丢掉。比如。 柯斯质粒在大肠杆菌中长久保留不稳固，所以不要屡次转接，每次接种时应接种单菌落。另 外，检查筛采用抗生素使用浓度能否正确。碱裂解不充分。使用过多菌体培育液，会致使菌 体裂解不充分，可减少菌体用量或增添溶液P1、P2和P3的用量。对低拷贝数质粒。 提取时，可加倍使用溶液P1、P2和P3，可能有助于增添质粒提取量和质料质量。 （7）溶液使用不妥。溶液P2、P3在温度较低时可能出现污浊，应置于37℃保温片晌直至 溶解为清明的溶液，才能使用。 8）吸附柱过载。不一样产品中吸附柱吸附能力不一样，假如需要提取的质粒量很大，请分多 次提取。若用富集培育基，比如TB或许×YT，菌液体积一定减少；若质粒或宿主菌是特别高 的拷贝数或生长率，则需调整LB培育液体积。 9）质粒未所有溶解。洗脱溶解质粒时，可适合加温或延伸溶解时间。 10）乙醇残留。漂洗液清洗后应离心尽量去除残留液体，树脂型试剂盒漂洗后应晾干树脂，