质粒提取原理和方法.docxVIP

质粒DNA提取的原理及方法 碱裂解法质粒DNA提取原理 质粒DNA提取主要包含以下几个方面：怎样将细胞裂解开释质粒DNA，怎样将质粒DNA和基 因组DNA分别开来，怎样去除RNA污染，怎样去除蛋白质和其余杂质。 质粒提取方法中，最常用的方法是碱裂解法，它拥有得率高，合用面广，快速，纯度高等特 点。其原理是： 强碱性条件下，质粒DNA和基因组DNA同时从细胞中开释出来，并发生变性。在pH中性， 并有高盐浓度存在的条件下，质粒DNA会快速发生复性，仍为可溶性状态，染色体DNA之间 交联形成不溶性网状构造，在去垢剂SDS作用下，染色体DNA与变性蛋白质和细胞碎片联合 形成积淀，经过离心去除积淀后，再用酚氯仿抽提进一步纯化质粒DNA，用异丙醇或乙醇沉 淀可将之纯化出来。 BIOMIGA企业质粒DNA纯化系列试剂盒，采纳碱裂解法质粒提取原理，在高盐环境下，采纳 硅胶膜特异性的吸附质粒DNA，而蛋白质不被吸附，最后用低盐洗脱液将DNA从膜上洗脱下 来，方法简单，快速，质量好，收获量高。 影响质粒提取的要素 影响质粒提取的要素有好多种，如质粒拷贝数，宿主菌株的种类，细菌的培育时间、培育基 种类、培育条件等等。 质粒拷贝数 质粒DNA最后收获量取决于质粒的拷贝数和质粒的大小。BIOMIGA企业质粒DNA提取系列试 剂盒，操作步骤合用于高拷贝数质粒的纯化，关于低拷贝质粒纯化提取，应加大开端菌液量