正交设计多糖提取实验方案.docxVIP

多糖 正交实验方案 基本提取工艺流程： 黄精、百合干燥粉碎——石油醚脱脂 2 次——加水热提——提取液过滤——水浴浓缩——离心取上清——加入 Sevag 试剂脱蛋白操作——取上层水层——加无水乙醇沉淀——收集沉淀——用水溶解 ——过滤除杂质——重复 1 次醇沉——收集沉淀——加水溶解定容——成为贮备液。 精密量取贮备液——加水稀释定容——供测多糖含量。 精密量取贮备液——置锥形瓶水浴蒸干——干燥3h——冷却后——称重，计算浸膏得率。 一、提取过程的正交方案： 1、称取黄精、百合各10g 干燥至恒重——粉碎成粗粉（过筛）——（置于圆底烧瓶中）加入5 倍量 （100ml）石油醚——水浴 50℃加热回流 1h，共 2 次，进行脱脂及除去小分子糖——弃液留渣，药渣晾干（置于培养皿中于通风处过夜晾干，或置于圆底烧瓶中水浴上加热至能轻松倒出）——（按 照正交设计表的要求）加适量蒸馏水，于适宜温度，水浴加热回流提取规定次数——合并提取液— 减压抽滤——水浴——浓缩（90℃）——至固定量 30ml（浓缩过量时补足体积）——4000r/min 离心 10min——（注射器抽取）取上清液 2、——置于锥形瓶中——加入 Sevag 试剂（氯仿：正丁醇=5:1）约等量——置于恒温水浴振荡器 50℃ 振荡 15min——改置于分液漏斗中静置 20min 以上——待其分层后，取最上层（从上口倒出） —— 重复操作 2 次——置于广口瓶，加醇处理，加入 4 倍量的无水乙醇（预冷过）——冰箱冷藏过夜使其沉淀——减压抽滤，收集沉淀——（连同滤纸一起）用 20ml 蒸馏水溶解——过滤除去水不溶物— —重复 1 次加醇沉淀，减压抽滤——收集沉淀，加少量蒸馏水溶解，加水稀释——定容至 50ml 容量瓶中，成为贮备液。 3、精密量取 1ml 贮备液，加至 100ml 容量瓶中，加水稀释至刻度，定容摇匀。供测定多糖含量。 4、精密量取 10ml 贮备液，置于（已干燥并精密称重的）小锥形瓶中，水浴蒸干，于 105℃烘箱干燥 3h，取出迅速置于玻璃干燥器内冷却 30min，迅速称重，计算浸膏得率。 浸膏得率=（干浸膏重量/药材质量)×（50/10) x 100% 注意事项： 1、粉碎不用太细，20-40 目均可。脱脂时圆底烧瓶可选择 500ml 或 1000ml 的。 2、9 份水浴浓缩条件应一致，置于水浴锅盖面上，注意不要打翻。 3、离心后取上清液时，用注射器抽吸，每编号用一支。 4、精密量取操作，用移液器或移液管 5、制备浸膏的小锥形瓶，约 50ml 规格的。应洁净，105℃干燥 2-3h 至恒重，迅速取出，置于玻璃干燥器内冷却 30min 后，带手套操作，迅速称量，记录空瓶重量。 6、加醇沉淀时，应置于磁力搅拌器上，在搅拌下缓慢加入无水乙醇。在抽滤时再取回搅拌子。 多糖提取正交因素表 水平 温度 提取时间 料液比 提取次数 1 （℃） 70 h 1 1:8 1 2 80 1.5 1:10 2 3 90 2 1:12 3 多糖提取正交试验表 编号 A 提取温度 B 提取时间 C 料液比 D 提取次数 多糖浸膏 多糖含量 1 ℃ 70 h 1 V：V 1:8 1 % % 2 70 1.5 1:10 2 3 70 2 1:12 3 4 80 1 1:10 3 5 80 1.5 1:12 1 6 80 2 1:8 2 7 90 1 1:12 2 8 90 1.5 1:8 3 9 90 2 1:10 1 k1 k2 k3 R 三、多糖脱蛋白及醇沉正交试验方案