鸭坦布苏病毒NS1蛋白的原核表达及ELISA检测方法的建立的中期报告.docxVIP

鸭坦布苏病毒NS1蛋白的原核表达及ELISA检测方法的建立的中期报告 中期报告： 一、研究背景： 鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus，DTMUV)是一种由RNA病毒家族的Flaviviridae科引起的禽流感病毒，主要影响鸭子的生产。目前，DTMUV的疫苗研制和诊断方法的建立仍然是一项重要的研究工作。其中，DTMUV的非结构蛋白NS1是DTMUV的一种重要蛋白，其免疫原性和毒力较强。因此，建立DTMUV NS1蛋白的原核表达及ELISA检测方法，对于DTMUV的诊断和疫苗研制具有重要意义。 二、研究目的： 本研究旨在建立DTMUV NS1蛋白的原核表达及ELISA检测方法，为DTMUV的诊断和疫苗研制提供有力的技术支持。 三、研究进展： 1. DTMUV NS1基因的克隆： 通过PCR扩增DTMUV NS1基因，并将其与pET28a载体进行重组，得到了DTMUV NS1蛋白的原核表达载体pET28a-NS1。 2. DTUMV NS1蛋白的原核表达： 将重组质粒pET28a-NS1转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株，分别在IPTG诱导和非诱导条件下进行原核表达。通过SDS和Western blot分析，证实了DTMUV NS1蛋白能够在大肠杆菌中表达。 3. DTMUV NS1蛋白的纯化： 利用Ni-NTA亲和层析柱对原核表达的DTMUV NS1蛋白进行了纯化，得到了高纯度的DTMUV NS1蛋白。 4. DTMUV NS1蛋白的ELISA检测方法建立： 利用纯化的DTMUV NS1蛋白和兔抗DTMUV血清，建立了DTMUV NS1蛋白的间接ELISA检测方法，并优化了该方法的反应条件。初步结果表明，建立的ELISA检测方法对DTMUV有良好的特异性和灵敏性，能够有效检测DTMUV感染的兔子血清样品。 四、研究成果： 1. 成功克隆了DTMUV NS1基因，并构建了DTMUV NS1蛋白的原核表达载体pET28a-NS1。 2. 成功在大肠杆菌中表达和纯化了DTMUV NS1蛋白。 3. 成功建立了DTMUV NS1蛋白的间接ELISA检测方法，并初步优化了该方法的反应条件。 五、下一步工作： 1. 进一步优化DTMUV NS1蛋白的原核表达条件，提高蛋白的表达量和纯度。 2. 收集更多DTMUV感染动物血清样品，验证建立的ELISA检测方法的可靠性和稳定性。 3. 探索DTMUV NS1蛋白的抗原表位以及DTMUV NS1蛋白在DTMUV的诊断和疫苗研制中的应用。