环介导等温扩增技术检测动物病原研究进展讲解.docxVIP

生物技术通报 BIOTECHNOLOGY BULLETIN2009 年增刊·技术与方法· 核酸扩增技术是分子生物学领域的一项重要的研究手段,其中 PCR 技术最为常用。但在应用过程中人们发现 PCR 技术存在一些不足,如靶基因易被污染,可能引起非特异性扩增,多种因素可以产生抑制扩增反应,扩增反应时间较长,一般需要几小时, 需要比较昂贵的 PCR 仪,不利于在基层实验室推广应用等。2000 年,日本学者Notomi 等[1]建立了一种新的核酸扩增方法—— —环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP 技术,该技术克服了 PCR 技术的一些缺点。目前已在人类及动植物细菌、病毒、寄生虫、真菌等病原体的检测中取得重要进展,在疫病诊断领域显示出广阔的应用前景。 1LAMP 技术原理 LAMP 技术依赖于能够识别靶序列上 6 个独立区域的两对特异性引物(内引物:FIP 和 BIP;外引物:F3 和 B3 和一种具有解旋功能且呈瀑布式扩增的 Bst DNA 聚合酶,在等温条件下可高效、特异的扩增靶序列。LAMP 反应过程是先由外部引物扩增出内部引物扩增所需要的模板,即起始反应物模板的合成;紧接着由内部引物引导合成靶基因 DNA 片段,由于内部引物扩增的 DNA 片段含有与该引物 5’端 DNA 片段的反向互补序列,因而这些反向互补序列