动物细胞工程(使用).pptVIP

2、诱导融合的因素 生物法：灭活的病毒诱导融合.(利用灭活仙台病毒是动物细胞融合所特有的。 这是由于病毒的磷脂外衣与动物细胞的膜十分相似的缘故。病毒外壳上的某些糖蛋白可能还有促进细胞融合的功能。) 化学法：聚乙二醇PEG诱导融合. 物理法：电激融合 病毒颗粒黏 附细胞表面 细胞膜连接 细胞膜被 病毒颗粒穿通 细胞融合、形成杂种细胞 本文档共45页；当前第31页；编辑于星期三\2点31分 3、动物细胞融合技术的应用 细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。 利用杂交瘤技术，制备单克隆抗体。 本文档共45页；当前第32页；编辑于星期三\2点31分 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体技术 核移植 动物细胞工程常用技术 其它动物细胞工程的基础 本文档共45页；当前第1页；编辑于星期三\2点31分 一、动物细胞培养的应用和概念： 1、概念：动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖. 2、原理：细胞增殖 本文档共45页；当前第2页；编辑于星期三\2点31分 定义：人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。 胰蛋白酶处理 取出组织 胚胎或幼龄动物器官组织 剪碎 单个细胞 细胞悬液 转入培养瓶内培养 （ 贴壁生长长成单层细胞。有接触抑制现象）。 ①原代培养 3：过程 图示 原代培养 本文档共45页；当前第3页；编辑于星期三\2点31分 强调一：细胞贴壁过程 ■细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 ■培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于帖附。 本文档共45页；当前第4页；编辑于星期三\2点31分 ■当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 强调二：接触抑制 本文档共45页；当前第5页；编辑于星期三\2点31分 本文档共45页；当前第6页；编辑于星期三\2点31分 定义： 当原代培养的细胞处于接触抑制后, 用胰蛋白酶处理,使细胞从瓶壁上脱离下来,然后加入新的培养液,将细胞分离稀释,并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内,这个过程称传代培养.（分瓶培养的过程） ②传代培养 本文档共45页；当前第7页；编辑于星期三\2点31分 3、动物细胞培养过程： 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 胰蛋白酶 10代细胞 原代培养 50代细胞 传代培养 细胞株 无限传代 细胞系 单个细胞 加培养液 遗传物质未改变 遗传物质已改变 原代培养特点：细胞贴壁、接触抑制 （分解细胞） 本文档共45页；当前第8页；编辑于星期三\2点31分 　　细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种10-50代的传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种50代以上的传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。 本文档共45页；当前第9页；编辑于星期三\2点31分 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 无限传代 原代培养 传代培养 知识点小结：各个新名词之间的联系 多数组织细胞固定在表面生长和分裂。 随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖 本文档共45页；当前第10页；编辑于星期三\2点31分 4.动物细胞培养的条件: 1）无菌无毒 的环境： 适宜的温度：人和哺乳动物细胞最适温度为36.5±0.5℃。 适宜的酸碱度：PH： 液体合成培养基：（糖、氨基酸）、促生长因子、（水、无机盐、微量元素）等；通常还需加入血浆、血清等天然成分。 4）气体环境： 2）营养： 3）温度和pH： “95％空气+5％CO2”的混合气体培养箱。氧气是细胞代谢必须的； CO2维持培养液的PH。 对培养液和所有培养用具无菌处理；培养液中添加抗生素防止培养过程中污染；定期更换培养液以清除代谢产物，防止对培养细胞造成危害。 本文档共45页；当前第11页；编辑于星期三\2点31分 .为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清？ 血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中必需氨基酸动物细胞本身不能合成，必须由培养液提供。 血清激素有胰岛素、生长激素等以及多种生长因子，能促进细胞的生长、增殖和贴附。 本文档共45页；当前第12页；编辑于星期三\2点31分 问题3：为什么用胰蛋白酶处理？ 问题1：、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？ 因为其细胞生命力旺盛，分裂能力强，分化程度低。 问题2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细