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项目3：革兰染色法 【目的要求】 掌握细菌涂片标本的制作及革兰染色法。 【实验内容】 细菌微小、无色半透明、未经染色而单用显微镜放大，仅能粗略地看到其大小和形态；欲观察清楚，必须进行染色。染色后还能认识细菌的各种不同结构，并可协助鉴别细菌。 染色方法有单染法和复染法。前者应用一种染料使细菌着色，用以观察细菌的大小、形态和 排列；后者用两种或两种以上的染料，有助于鉴别细菌，故又称鉴别细菌染色法。革兰染色法为最常用的染色法。 一、细菌涂片的制作 要进行细菌染色，首先需制作细菌涂片，制片的一般过程分涂片、干燥和固定三个步骤。 【材 料】 普通琼脂平板菌落或斜面培养物，生理盐水，载玻片，接种环、酒精灯等。 【方 法】 涂片：在玻片上加少量生理盐水，用接种环取细菌培养物少许，在生理盐水中混匀，并涂布一层薄膜，取材勿过多，以免涂片太厚。如用液体培养物，不需加生理盐水，有菌的接种环应 立即在酒精灯火焰上烧灼灭菌。 干燥：涂片置室温自然干燥，也可在酒精灯弱火处略烘使干，切勿用高温烘烤。 固定：将干燥的涂片面向上在酒精灯火焰上来回通过三次，直至手背试触涂片反面略有烫感为限。固定的目的是杀死细菌并使菌体与玻片粘附较牢，以免染色时被染料和水冲掉。 二、革兰（Gram）染色法 革兰氏染色法(Gram’s stain)是最常用的细菌染色法，本实验要求同学能正确掌握此染色方法的操作技术，理解其在鉴别细菌上的重