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uplc测定银翘解毒口服液中4种活性成分 银托解毒口服液起源于经典的银托散。在临床使用中，它是通过添加或减少来获得的有效经验。包括金银花、连翘、野菊花、牛刀等药物。本次实验建立了高效、快速的超高效液相色谱法, 一次进样同时测定制剂中绿原酸等4个活性成分的含量, 为全面控制制剂的质量提供了有效保证。 1 材料和方法 1.1 试剂与药品制品 AcquityTM超高效液相色谱仪 (Waters) ;XP6型电子天平 (METTLER TOLEDO) 。 甲醇 (色谱纯, 美国Merck公司) , 乙腈 (色谱纯, Merck公司) , 水 (密理博纯水仪制备) ;甲酸 (分析纯, 上海化学试剂有限公司) 。牛蒡苷 (批号:110819-200606) , 蒙花苷 (批号:111528-200504) , 绿原酸 (批号:110753-200212) , 中国药品生物制品检定所。隐绿原酸对照品 (批号:905-99-7, 上海同田生物技术有限公司, 纯度98%) 。银翘解毒口服液 (实验室自制, 批号:130912、130916、130920) 。 1.2 混合对照品溶液的制备 精密称取蒙花苷、牛蒡苷、隐绿原酸、绿原酸对照品适量, 置于25mL量瓶中, 以50%乙腈为溶剂, 溶解并稀释至刻度, 摇匀, 得到蒙花苷、牛蒡苷、隐绿原酸、绿原酸浓度分别为250.4、228.8、203.2、406.4μg/mL的混合对照品储备液, 备用。 1.3 微孔滤膜制备 精密量取银翘解毒口服液2.5mL, 置10mL量瓶中, 加重蒸水稀释至刻度, 摇匀, 滤过 (0.45μm微孔滤膜) , 取续滤液, 备用。 2 结果 2.1 u3000酸、水、水、水 色谱柱:Waters BEH C18(2.1mm×100mm, 1.7μm) ;采用乙腈 (A) 与0.1%甲酸 (B) 进行梯度洗脱, 0~6min (A:5%~32%) , 6~7min (A:32%) , 7~8min (A:32%~5%) , 8~12min (A:5%) , 流速0.3mL/min, λ=300nm, 柱温40℃, 进样量:1μL。 按照“2.1”项下色谱条件分别进样对照品溶液和样品溶液, 结果, 所检测的4个成分均能达到基线分离, 理论塔板数以绿原酸计在8万以上, 见图1。 2.2 标准曲线的测定 精密量取0.5、1、2、4、8mL的对照品溶液, 置于10mL量瓶中, 并用50%乙腈稀释至刻度后摇匀备用, 按“2.1”的色谱条件进行测定。以对照品的峰面积积分值 (Y) 对相应的浓度 (X) 进行线性回归, 得回归方程, 结果见表1。 2.3 仪器精密度试验 精密量取“1.3”项下混合对照品储备液2mL, 置10mL量瓶中, 加50%乙腈稀释至刻度, 摇匀, 按“2.1”项下条件连续进样6次, 测定记录绿原酸、隐绿原酸、牛蒡苷、蒙花苷的峰面积并计算其RSD (n=6) , 结果分别为:0.85%、1.13%、1.26%、1.33%, 表明本台仪器精密度良好。 2.4 稳定性试验ld 取批号为130912的样品, 按“1.3”项下方法制备供试品溶液, 分别在0、2、4、8、12、24h取样, 按照“2.1”项下条件测定, 记录绿原酸、隐绿原酸、牛蒡苷、蒙花苷的峰面积并计算其RSD (n=6) , 分别为0.97%、1.05%、1.67%、1.38%, 表明银翘解毒口服液在24h内稳定性良好。 2.5 平均浓度和rsd 取批号为130912样品, 按“1.3”项下方法制备供试品溶液, 平行制备6份, 按照“2.1”项下条件取样测定, 结果6份样品中绿原酸、隐绿原酸、牛蒡苷、蒙花苷的平均浓度和RSD (n=6) 分别为271.8μg/mL, 1.06%;102.6μg/mL, 0.95%;30.6μg/mL, 1.40%;100.2μg/mL, 1.73%, 实验重现性良好。 2.6 加样回收率和rsd 取批号为130912的样品, 精密吸取1.25mL, 置10mL量瓶中, 加入含绿原酸340.1μg/mL、隐绿原酸127.5μg/mL、牛蒡苷38.1μg/mL、蒙花苷124.7μg/mL的混合对照品溶液4mL, 加50%乙腈稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 平行制备6份, 按“2.1”项下条件测定, 计算4个成分的回收率和RSD (n=6) , 分别为98.2%, 2.37%;97.1%, 2.85%;95.4%, 2.63%;96.7%, 2.19%。表明回收率良好。 2.7 样品质量浓度测定 取3批银翘解毒口服液, 按照“1.3”项下操作制备供试品液, 每批平行3份, 按“2.1”项下色谱条件测定, 每份进样2次, 计算每批样品中各成分的质量浓度, 结果见表2。 3 不同活性成