利用DGGE法研究微生物肥料培养过程中菌群的变化的中期报告.docxVIP

利用DGGE法研究微生物肥料培养过程中菌群的变化的中期报告 本研究旨在利用DGGE法研究微生物肥料培养过程中菌群的变化。本中期报告主要介绍实验的设计、方法和结果分析。 实验设计： 本实验利用复合微生物菌剂制备微生物肥料，并分别在制备过程的不同时间点（0天、3天、7天、14天）采集样品进行DGGE分析。实验共设置4个处理组，每个处理组设3个重复样品。控制组为无菌培养基，设3个重复样品。所有样品均经过DNA提取、PCR扩增和DGGE电泳分离操作。 方法： 1. 制备微生物菌剂：选用厨余垃圾堆肥中的优势菌株，分别以对数生长期维持两代培养,然后混合制备复合微生物菌剂。 2. 制备微生物肥料：将制备好的微生物菌剂分别与腐熟鸡粪、腐熟生化污泥和稻草混合，制备微生物肥料。 3. 采样：在制备微生物肥料过程的不同时间点（0天、3天、7天、14天）采集样品，控制组为无菌培养基。 4. DNA提取：从所有样品中提取总DNA，利用Tiangen DNA纯化试剂进行纯化处理。 5. PCR扩增：采用8对通用细菌16S rRNA基因引物，扩增出与细菌16S rRNA相对应的449 bp片段。 6. DGGE电泳：将PCR扩增产物进行DGGE电泳分离，通过可视化法分析DGGE分析图，并计算Simpson多样性指数。 结果分析： 1. 细菌DGGE分析图：结果显示从各个时间点不同处理组得到丰富的DGGE分析图，每组样品间的DGGE分析结果存在一定差异。 2. Simpson多样性指数：由于从不同时间点及处理组的样品中得到不同的DGGE分析图，在结果分析中采用Simpson多样性指数进行统计分析。结果显示在微生物肥料制备过程中，细菌DGGE图谱的Simpson多样性指数分别为0.86、0.88、0.78和0.90。而在无菌培养基中，Simpson多样性指数为0.96。 结论： 本实验利用DGGE法研究微生物肥料制备过程中菌群的变化，结果显示不同时间点及处理组得到不同的DGGE分析图谱，Simpson多样性指数呈现出一定变化趋势。未来还需进一步进行样品多次测定以得到更准确的结果。