应用哺乳动物细胞表面抗体展示技术构建登革病毒特异性全长人源抗体库的中期报告.docxVIP

应用哺乳动物细胞表面抗体展示技术构建登革病毒特异性全长人源抗体库的中期报告 本研究致力于通过采用哺乳动物细胞表面抗体展示技术，构建登革病毒特异性全长人源抗体库，研究表明，抗体库的构建取得了一定的进展。 首先，我们通过选择3个登革病毒血清型，分别是1型、2型和4型，从人类免疫库中抽提出总RNA，随后进行反转录以获取cDNA。然后，我们设计了一套登革病毒E蛋白的全长片段的PCR扩增引物，将每个血清型的E蛋白的全长片段扩增出来，并进行连接到相应的表达载体上，形成了3个登革病毒E蛋白全长片段表达载体。 下一步，我们以HEK 293T细胞作为宿主细胞，将已构建好的表达载体转染至HEK 293T细胞中，并经过Western Blot和ELISA等实验手段鉴定，确证成功表达了抗原E蛋白。 接下来，我们通过使用单链抗体库，通过蚕蛹细胞杂交技术，构建出了一套登革病毒E蛋白的抗体库，并进行了高通量的筛选工作，筛选出了与登革病毒E蛋白特异性结合的单克隆抗体。我们进一步通过对这些单克隆抗体进行克隆扩增、序列测定和构建表达载体，并将它们表达在HEK 293T细胞的细胞膜表面进行表面抗体展示，证明了这些单克隆抗体具有与抗原特异性结合的能力。 未来，我们将继续优化筛选方案，扩大抗体库规模，并筛选出针对特定登革病毒血清型或某个特定抗原表位的高亲和力抗体。此外，也将通过对该抗体库进行应用验证，以期获得具有临床应用价