猪圆环病毒2型ORF2蛋白原核表达及其ELISA抗体检测方法的建立的中期报告.docxVIP

猪圆环病毒2型ORF2蛋白原核表达及其ELISA抗体检测方法的建立的中期报告 猪圆环病毒2型（Porcine circovirus 2，PCV2）是猪源性疾病的重要病原体之一，其感染会导致猪的免疫功能下降，引发多种疾病。其中，PCV2感染导致的亚临床型病毒感染（Subclinical PCV2 infection，SPI）是猪养殖过程中经常遇到的病例之一。 ORF2是PCV2基因组中编码Capsid蛋白的开放阅读框（Open Reading Frame，ORF）之一，是PCV2病毒的重要结构蛋白，在PCV2感染过程中，是PCV2病毒颗粒的主要成分，同时也是感染后免疫反应中的重要抗原。目前，PCV2的ELISA抗体检测方法主要依赖传统的PCV2灭活病毒颗粒作为抗原，但是这种方法有缺点，如需要大量病毒颗粒作为抗原、操作复杂、灵敏度低等。 因此，本研究旨在构建一种基于ORF2蛋白的ELISA抗体检测方法。首先，我们将ORF2基因克隆到表达载体pET28a中，并在大肠杆菌BL21（DE3）中原核表达并纯化ORF2蛋白。通过Western blot检测和质谱分析，证实其纯度和活性。其次，以ORF2蛋白作为抗原，建立了一种竞争性ELISA（cELISA）抗体检测方法。优化实验条件后，该方法具有较高的灵敏度和特异性，可以检测到PCV2感染后猪血清中PCV2特异性抗体，同时具有与传统抗原的检测方法相似的灵敏度。 综上，我们成功地建立了一种基于PCV2 ORF2蛋白的ELISA抗体检测方法，将为后续PCV2感染的诊断、预防和控制提供重要的工具。