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鞭毛染色实验报告 一．实验目的 学习并掌握鞭毛染色法并了解鞭毛的形态特征 巩固显微镜操作技术及无菌操作技术 学习压滴法观察细菌运动性（活细胞） 二．实验原理 细菌鞭毛染色法的基本原理 简单染色法适用于一般的微生物菌体的染色，而某些微生物具有一些特殊结构，如鞭毛，对它们进行观察之前需要进行有针对性的染色。 鞭毛是细菌的纤细丝状的运动器。鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。鞭毛直径一般为10~30nm，只有用电镜才可以直接观察到。若要用普通光学显微镜观察，必须使用鞭毛染色法。首先用媒染剂处理，使媒染剂附着在鞭毛上使其加粗，然后用碱性复红（gray氏染色法）、碱性复品红（leifson氏染色法）、硝酸银（west氏染色法）或结晶紫（difco氏染色法）进行染色。 压滴法观察活菌运动的基本原理 鞭毛的功能相当于船的螺浆，在水中可以高速旋转从而推动菌体前行，因此水体环境才是鞭毛细菌自由驰骋的天地。鞭毛的旋转速度是非常快的，每秒钟旋转两百到一千多转，比一般的电动机要快得多。鞭毛的高速旋转是由其附着于菌体上的基体旋转带动的，基体实际上就是鞭毛的基部，它由一个中轴套上两个或四个环构成，镶嵌固定在细菌的体表（细胞膜和细胞壁）中，在科学家的眼中，基体简直就是一台精巧的纳米机械-分子马达，但这个马达并不是靠电流驱动，而是用伴随着细胞膜两侧质子梯度的消失产生的生物能量atp来驱动，鞭毛马达还可以转向（从反时针旋转变为顺时针旋转）从而使菌体发生翻滚进而改变细菌的运动方向，事实上细菌在游动时也并不是单纯地一直朝前游，而是伴随着不时的随机翻滚转向，但从表观上看仍表现为细菌的前行。 细菌未染色时无色透明，在显微镜下主要靠细菌的折光率与周围环境的不同来进行观察。若想观察的更加清晰，可以滴加稀释美兰等染液进行染色，注意不要染色过重，以免影响观察，有鞭毛的细菌运动活泼，且不同时向一个方向运动，而无鞭毛的细菌则呈不规则布朗运动。这样便可以在光学显微镜下观察到细菌的运动。 三．实验器材 菌种枯草芽孢杆菌（周生鞭毛）1~2d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，铜绿假单胞菌（端生鞭毛）1~2d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物等 溶液和试剂 稀释美兰溶液，质量分数为95%的乙醇--水溶液，蒸馏水，硝酸银染液a液和b液等 ? 仪器和其它用品 酒精灯，载玻片，盖玻片，显微镜，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，接种环，小试管，烧杯，试管架，载玻片夹子，滴管和滤纸等 四．实验内容 压滴法观察活菌运动（实验步骤流程）： 详细步骤： 洗片 用自来水和去污粉将载玻片清洗干净，然后用蒸馏水冲洗 涂片 在载玻片的一端滴加一滴或半滴蒸馏水，采用无菌操作将所要观察的菌种移动到水滴中少许（稍显浑浊即可），涂片完成 滴加稀释美兰 将稀释美兰滴加到涂片上，滴加均匀，注意不要滴加过多，否则影响活菌运动的观察 ? 加盖玻片 加盖玻片时首先使盖玻片的一端接触载玻片上的液滴的一端，然后再将另一端缓缓放下，目的是防止气泡的产生，以免影响观察 迅速镜检（暗光） 由于菌体是放在蒸馏水中的，而且滴加的稀释美兰对其也有一定的影响，所以装片做好后要迅速镜检，以取得最佳的观察效果 详细步骤： 洗片 用自来水和去污粉将载玻片清洗干净，然后用蒸馏水冲洗 95%乙醇溶液浸泡 将洗好的载玻片放入盛有95%乙醇--水溶液的培养皿中，浸泡3~5min后取出晾干，目的是将载玻片上的油污等洗掉? 涂片 在载玻片的一端滴加一滴或半滴蒸馏水，采用无菌操作将所要观察的菌种移动到水滴中少许（稍显浑浊即可），将载玻片倾斜使液滴从载玻片的一端流到另一端，然后用吸水纸吸取多余的液滴，涂片完成 自然干燥 滴加硝酸银a液 向涂片上滴加适量的硝酸银a液，保持3~5分钟 水洗 将上一步中所滴加的硝酸银a液洗掉，注意防止将涂片中的菌种冲掉 硝酸银b液冲洗 用硝酸银b液冲洗涂片，覆盖45左右，宜稍稍加热 水洗 自然干燥（室温下） 镜检 将做好的涂片放到显微镜下，由多到少观察两种菌，以方便找到鞭毛（注：枯草杆菌的菌体较大，为周生鞭毛，也可能会出现侧生鞭毛的现象，这是因为鞭毛断掉；铜绿假单胞菌菌体较小，为端生鞭毛） 五．实验结果与分析 1、实验照片 鞭毛染色 （枯燥芽孢杆菌）形态：着色均匀，单个细胞 0.7-0.8*2微米，无荚膜，周围鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌 （铜绿假单细胞菌） 形态特征：呈球杆状，成对成锻炼状排列，菌体的一段有单鞭毛，用电子显微 镜能观察得到它的运动方式 （枯燥的运动方式） 2．实验结果分析 通过本次鞭毛染色实验，我认识到，以下几个方面决定了鞭毛染色是否成功。 染色用玻片干净无油污是鞭毛染色成功的先决条件。 菌种的菌龄。老龄的菌种的鞭毛极易脱落，因此染色后很难看见有鞭毛。可以选择菌落边缘的幼龄菌落。 在盖玻片上接种的时候，只需要在水中轻轻地沾