海洋放线菌的培养鉴定与分离方法.docx

海洋放线菌的培养鉴定与分离方法 一、 放线菌的分布 放线菌常以抱子或菌丝状态极其广泛地存在于自然界。不论数量和种类，以土壤中最多。据 测定，每克土壤可含数万乃至数百万个抱子，但受土壤性质、季节、作物种类等条件的影响。 一般情况下，肥土较瘦土多，农田土比森林土多，中性或偏碱性土壤中也较多。土壤环境因 子如有机质、水分、温度、通气状况等也影响其数量。它适宜在含水量较低的土壤内生长。 而厩肥和堆肥中仅限于高温放线菌活动。放线菌所产生的代谢产物往往使土壤具有特殊的泥 腥味。 河流和湖泊中，放线菌数量不多，大多为小单抱菌、游动放线菌和抱囊链霉菌，还有少数链 霉菌。海洋中的放线菌多半来自土壤或生存在漂浮海面的藻体上。海水中还存在耐盐放线菌。 大气中也存在着大量的放线菌菌丝和抱子，它们并非原生的微生物区系，而是由于土壤、动 植物、食品甚至衣物等表面均有大量的放线菌存在，由于它们耐干燥，常随尘埃、水滴，借 助风力飞入大气所致。 食品上常常生长放线菌，尤其在比较干燥、温暖的条件下易于大量繁殖，使食品发出刺鼻的 霉味。 健康动物，特别是反刍动物的肠道内有着大量的放线菌，它们可有是肠道内定居的微生物， 堆肥中的高温放线菌可能来源于此。在动物和植物体表有大量的腐生性放线菌，偶尔也有寄 生性放线菌存在。 了解放线菌的分布，对于进一步开发放线菌资源，发现和筛选新的抗生素，无疑是很重要 的。 二、 放线菌的形态与结构 放线菌菌体为单细胞，大多由分枝发达的菌丝组成，最简单的为杆状或具原始菌丝。菌丝直 径与杆状细菌差不多，大约1微米。细胞壁化学组成中亦含原核生物所特有的胞壁酸和二氨 基庚二酸，不含几丁质或纤维素。革兰氏染色阳性反应，极少阴性。有许多放线菌对抗酸性 染色亦吴阳性反应，像诺卡氏放线菌。它与结核杆菌相比，如果脱色时间太长也可成为阴性， 这是诺卡氏菌与结核杆菌的区别之一。 放线菌菌丝细胞的结构与细菌基本相同。根据菌丝形态和功能可分为营养菌丝、气生丝和抱 子丝三种。 （一） 营养菌丝又叫初级丝体或一级菌丝体，匍匐生长于培养基内，主要生理功能是吸收营 养物，故亦称基内菌丝。营养菌丝一般无隔膜，即使有也非常少；直径0.2-0.8微米，但长 度差别很大，短的小于100微米，长的可达600微米以上；有的无色素，有的产生黄、橙、 红、紫、蓝、绿、褐、黑等不同色素，若是水溶性的色素，还可透入培养基内，将培养基染 上相应的颜色，如果是非水溶性（或脂溶性）色素，则使菌落吨呈现相应的颜色。因此，色素 是鉴定菌种的重要依据。 （二） 气生菌丝又称二级菌丝体。营养菌丝体发育到一定时期，长出培养基外并伸向空间的 菌丝为气生菌丝。它叠生于营养菌丝上，以至可覆盖整个菌落表面。在光学显微镜下，颜色 较深，直径比营养菌丝粗，约1-1.4微米，其长度则更悬殊。直形或弯曲而分枝，有的产生 色素。 （三） 抱子丝当气生菌丝体发育到一定程度，其上分化出可形成抱子的菌丝即抱子丝，又名 产抱丝或繁殖菌丝。抱子丝的形状和在气生菌丝上的排列方式，随菌种而异。 抱子丝的形状有直形、波曲和螺旋形之分。螺旋状抱子丝的螺旋结构与长度均很稳定，螺旋 数目、疏密程度、旋转方向等都是种的特征。螺旋数目通常为5-10转，也有少至1个多至 20个的；旋转方向多为逆时针，少数种是顺时针的。抱子丝的排列方式，有的交替着生， 有的丛生或轮生。抱子丝从一点分出3个以上的抱子枝者，叫做轮生枝。它有一级轮生和二 级轮生。上述特征，皆可作为菌种鉴定的依据。 抱子丝生长到一定阶段可形成抱子。在光学显微镜下，抱子呈球形、椭圆形、杆状、瓜子状 等；在电子显微镜下还可看到抱子的表面结构，有的光滑、有的带小疣、有的生刺（不同种 的抱子，刺的粗细长短不同）或有毛发状物（图2-63）。抱子表面结构也是放线菌种鉴定的重 要依据。抱子的表面结构与抱子丝的形状、颜色也有一定关系，一般直形或波曲状的抱子丝 形成的抱子表面光滑；而螺旋状抱子丝的形状、颜色也有一定关系，一般直形或波曲状的抱 子丝形成的抱子表面光滑；而螺旋状抱子丝形成的抱子，有的光滑，有的带刺或毛；白色、 黄色、淡绿、灰黄、淡紫色的抱子表面一般都是光滑型的，粉红色抱子只有极少数带刺，黑 色抱子绝大部分都带刺和毛发。 由于抱子含有不同色素，成熟的抱子堆也表现出特定的颜色，而且在一定条件下比较稳定， 故也是鉴定菌种的依据之一。应指出的是，抱子的形态和大小不能笼统地作为分类鉴定的重 要依据。因为，即使从一个抱子子丝分化出来的抱子，形状和大小可能也有差异。 放线菌的发育周期是一个连续的过程。现以链霉菌为例，将放线菌生活史概括如下：抱子在 适宜条件下萌发，长出1-3个芽管；芽管伸长，长出分枝，分枝越来越多形成营养菌丝体； 营养菌丝体发育到一定阶段，向培养基外部空间生长成为气生菌丝体；气生菌丝体发育到一