T_CVDA 4-2022 动物中东呼吸综合征冠状病毒中和抗体检测技术.docxVIP

学兔兔　ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ　标准下载ICS?11.220 学 兔 兔 　ｗ ｗｗ ．ｂ ｚｆ ｘｗ ．ｃ ｏｍ 　标 准 下 载 B?41  T/CVDA 团体标准 T/CVDA?4—2022 动物中东呼吸综合征冠状病毒中和抗体检 测技术 Detecting?technique?of?neutralization?antibody?against?MERS-CoV?in?animals 2022?-?07?-?19?发布 2022?-?07?-?25?实施 中国兽药协会 发布 学兔兔　ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ　标准下载T/CVDA?4—2022 学 兔 兔 　ｗ ｗｗ ．ｂ ｚｆ ｘｗ ．ｃ ｏｍ 　标 准 下 载 目 次 前言? ? II 1? 范围? ? 1 2? 规范性引用文件? ? 1 3? 缩略语? ? 1 4? 试剂和材料? ? 1 5? 器材和设备? ? 2 5.1? 器材? ? 2 5.2? 设备? ? 2 6. 动物血清? ? 2 6.1? 样品采集? ? 2 6.2? 样品制备? ? 2 6.3? 样品处理? ? 2 7? VNT? 试验操作 ? 2 7.1? 安全防护? ? 2 7.2? 材料准备? ? 3 7.3? 检测操作? ? 3 8? 结果观察与判定? ? 4 8.1? 染色结果观察? ? 4 8.2? 结果判定? ? 4 I 学兔兔　ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ　标准下载T/CVDA?4—2022 学 兔 兔 　ｗ ｗｗ ．ｂ ｚ ｆｘ ｗ． ｃ ｏｍ 　 标 准 下 载 前 言 本标准按照GB/T?1.1-2020给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由中国兽药协会提出并归口管理，由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所起草。 本标准主要起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、宁夏大学、中牧实业股份有限公司。 本标准主要起草人：步志高，刘任强，温志远，山丹，龚振兴，张蕾，华荣虹，葛金英，王喜军， 王翀。 本标准为首次发布。 II 学兔兔　ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ　标准下载T/CVDA?4—2022 学 兔 兔 　ｗ ｗｗ ．ｂ ｚｆ ｘｗ ．ｃ ｏｍ 　标 准 下 载 动物中东呼吸综合征冠状病毒中和抗体检测技术 1?范围 本标准规定了用于动物东呼吸综合征病毒血清中和抗体定量测定的病毒中和试验（VNT）的实验操 作方法及结果判定标准。 本标准适用于动物血清中中东呼吸综合征冠状病毒中和抗体的定性检测和定量测定。 2?规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB?/T?1.1-2020?标准化工作导则?第1部分：标准化文件的结构和起草规则。 GB/T6682—2008?分析实验室用水规格和试验方法。 GB19489—2008?实验室生物安全通用要求。 GB14922-94：实验动物微生物学和寄生虫学检测等级（啮齿类和兔类）。 3?缩略语 下列缩略语适用于本文件。 MERS：中东呼吸综合征（Middle?East?respiratory?syndrome）； VNT：病毒中和试验（viral?neutralization?test）； BSL-2：生物安全2级实验室（Biosafety?Laboratory?Level2）； DMEM：细胞基础培养基（Dulbeccos?Eagle’s?Minimum?Essential?Medium）； PBS：磷酸盐缓冲液（Phosphate-Buffered?Saline）； TCID50：半数组织培养感染量（Median?Tissue?Culture?Infective?Dose）； VSV：水泡性口炎病毒（Vesicular?Stomatitis?Virus）； eGFP：增强绿色荧光蛋白（enhanced?green?fluorescent?protein）； S?protein：纤突蛋白（spike?protein）。 4?试剂和材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 4.1?水：GB/T6682-2008，ddH2O。 4.2?中东呼吸综合征冠状病毒抗体阴性血清，为利用ELISA和RT-PCR方法验证均为阴性的骆驼阴性血清 （由标制单位提供）。 4.3?中东呼吸综合征冠状病毒抗体阳性血清，为rLa-MERSs重组新城疫病毒两