高效液相色谱基本原理(共49张PPT).pptxVIP

高效液相色谱基本原理;;高效液相色谱法; 色谱图;色谱峰的相关基本术语;峰高（Peak Heigh)：从峰最大值到峰底的距离 峰面积（Peak Area)：峰与峰底之间的面积 峰面积=半峰宽*出峰高度 (A=h*W) ;两个相邻峰的分离程度。以两个组份保留值之差与其平均半峰宽值的比来表示：;;HPLC的仪器构成;定量结果的数种计算方式 气固色谱-固定相是具有多孔性及大表面积的吸附剂微粒。 保留值：保留时间(tR):试样组分从进样到出现最高峰时多需要的时间。 柱内固定相是分离的关键。 峰面积=半峰宽*出峰高度 (A=h*W) 色谱柱由柱管和其中的固定相组成。 高效液相色谱法优点在于高速、高效、高灵敏度、高自动化。 是液态固定相附着的载体 色谱柱不能很长，柱效相对较低 以两个组份保留值之差与其平均半峰宽值的比来表示： 决定组分质量、浓度或物质在样品中占的百分比 出峰面积分析 (peak area) 当时，两峰完全分离（分离程度为大于99. 气、液相色谱的定量分析 柱内固定相是分离的关键。 外标法 (external standard);高效液相色谱柱是决定分离效率的核心部分。一般采用不锈钢材料制成。色谱柱内壁应经过精密加工，具有高的光滑度。两端接头采用不锈钢或聚四氟乙烯密封圈。 常用色谱柱的内径在2-6mm，长度在10-50cm。色谱柱中紧密填充粒度为5-10微米的颗粒状固定相。最常用柱子是C-18柱（ODS柱）;高效液相色谱可分为分析型和制备型两种。分析型色谱柱常用内径为1~6mm的管子，而制备柱则用较粗的管子，一般用内径为25mm的管子，有的可达60mm。柱子长度从几十厘米到几米，一般为25cm到1m。 ;③检测系统;紫外-可见检测器：是高效液相色谱中最广泛应用的检测器，适用于那些能在紫外/可见区有吸收的物质。传统的紫外-可见检测器一般选择在最大吸收波长处进行检测。近年来发展起来的二极管阵列检测器可以实时记录各个波长下的吸光度，可以给出每个色谱峰的保留时间-吸光度-吸收波长的三维谱图。;荧光检测器：适用于检测紫外光激发后能产生荧光的物质。其灵敏度比紫外-可见检测器高2-3个数量级，可检测出ng级痕量有机物。具有极高的灵敏度和良好的选择性。;流???相的选择;2）分离方式的选择;气相色谱法;基本原理 ;GC 系统概论;气 相 色 譜;GC的基本原理;应用领域;2. 气相色谱系统;1-载气钢瓶；2-减压阀；3-净化器；4-气流调节阀； 5-转子流量计；6-气化室；7-色谱柱；8-检测器;①气路系统 气路系统是一个密闭的管路系统，载气在其中稳定连续地运行，要控制好载气的纯度和载气流速。它包括载气源、净化干燥器、减压阀、稳压阀、稳流阀、压力表、流量计、各种管线等。常见的气相色谱仪有单柱单气路和双柱双气路两种类型，当前一般气相色谱仪都是双柱双气路的，这种气路结构的仪器既能用于恒温分析，也适用于程序升温分析。;②进样系统 由进样器和气化室组成。气化室的作用是将液体样品瞬间气化，但又不发生分解。要把气体或液体样品快速而定量地加到色谱柱上端。 ③分离系统(色谱柱) 色谱柱是气相色谱的心脏，样品的分离就是在柱内进行的。色谱柱由柱管和其中的固定相组成。填充柱的内径约为2～6mm，长约1—6m，用不锈钢、铜、玻璃或聚四氟乙烯等材料制成，管内装填颗粒状的固定相。色谱柱的外形有螺旋形和u型两种，色谱柱被安装在密闭隔热的柱箱内，以利于准确控制柱温。柱内固定相是分离的关键。;④检测系统 检测系统由检测器及其控制装置组成，其作用是将被色谱柱分开的各个组分的浓度或质量信号转变成易于测量的电信号，并输送给放大记录系统。检测器的温度对灵敏度等有一定影响，故也应进行严格控制。检测器是色谱仪中的一个关键部件。常用的检测器有热导池检测器、氢火焰离子化检测器、电子捕获检测器和火焰光度检测器等类型。;⑤记录系统 该系统包括放大器、记录仪或数据处理装置等。由于检测器产生的电信号十分微弱，所以必须用放大器放大，再由记录仪记录下代表各组分的色谱图，供定性定量分析用。采用气相色谱与微机联机的仪器，操作人员可直接使用按色谱术语设计的键盘，来完成各种功能的色谱操作和数据的处理，并将结果直接打印出来，快速准确。;⑥温度控制系统 温度是气相色谱分析中的最重要最敏感的工作条件之一，要求对气化室、检测器和色谱柱分别进行严格的温度控制，控温精度均为±0.1℃。仪器上有3套独立的自动温度控制电路及其辅助设备，分别使气化室、检测器恒定在适当温度，使柱温恒定或按程序升温。温度控制系统的主要元件有铂电阻或热电偶等热敏元件，电子放大器、可控硅、电热器等，柱箱中还有排风扇。通常用温度计和测温毫伏计来显示温度的高低。;玻璃