菜花DNA的粗提取与鉴定.docxVIP

菜花DNA的粗提取与鉴定 1.实验原理 （1）DNA与杂质的溶解度不同，在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最低。 （2）在提取液中加入冷却的95%酒精溶液中，能析出DNA，在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺被染成蓝色。 2.实验步骤 （1）实验材料的选取：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但是使用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大。例如，菜花细胞的染色体数是2n=18，香蕉细胞的染色体数是3n＝33，染色体数还算比较多。 （2）破碎细胞：动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。植物细胞需要研磨液在研钵中充分研磨。研磨液中的十二烷基硫酸钠（SDS），有利于核蛋白变性并与DNA分离，乙二胺四乙酸二钠（EDTA）能抑制DNA酶活性，防止核DNA被酶解。 （3）去除滤液中的杂质：利用DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同，控制NaCl溶液的浓度去除杂质。 （4）DNA的析出：将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等、冷却的酒精溶液，静置2～3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。 （5）DNA的鉴定：取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液5ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4ml的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变蓝。 3.实验成功的关键 （1）材料的选择：本实验选用菜花，是因为菜花细胞无色，容易观察颜色变化。取表层花的部分进行研磨是因为这个部位细胞处于迅速分裂状态，DNA含量高。 （2）研磨充分与否：如果研磨不充分，细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量偏少，会导致看不到絮状沉淀物或沉淀物量少、用鉴定试剂鉴定不显示蓝色等。研磨充分，DNA释放的量更多，提取和鉴定的效果则更加明显。 （3）研磨仪器的选择：相较于传统的研磨工具研钵，研磨过滤器具有研磨更快速、充分、安全、节约试剂等优势，提取和分离一“器”呵成。 （4）移液动作轻柔：提取过程中，加入冷的95%乙醇后，需倾斜试管，吸头接触试管内壁，让溶液贴着管壁缓慢流下，切忌快速加入冲散已析出的DNA絮状物。旋转试管动作快速轻柔，并始终沿着一个方向，使得絮状物析出并凝结成团，切忌剧烈振荡，以免破坏絮状物。 （5）试剂品质与配制规范：DNA鉴定试剂是本实验成功的关键试剂，不仅要严格遵循A、B液的配比，更要遵循“现配现用”的基本原则，以保证最佳的实验效果。 ?典型试题解析? 试题1：在利用菜花进行“DNA粗提取与鉴定”实验中，相关操作正确的是（　　） A.将DNA丝状物放入二苯胺试剂中沸水浴后冷却变蓝 B.向菜花研磨液中加入适量的蒸馏水，以降低DNA酶活性 C.向质量浓度为2mol/L氯化钠溶液中加入蒸馏水析出DNA时，应缓慢加入，直到出现黏稠物为止 D.向溶有粗提物的NaCl溶液中加入冷却的体积分数95%的酒精，可获得较纯净的DNA 解析： 首先将DNA丝状物溶解在一定浓度的氯化钠溶液中，再滴加二苯胺试剂和水浴加热，A错误；向菜花研磨液中加入适量的蒸馏水，以降低DNA的溶解度，不会降低DNA酶的活性，B错误；向质量浓度为2mol/L氯化钠溶液中加入蒸馏水析出DNA时，应缓慢加入，直到出现的黏稠物不再增加为止，C错误；DNA不溶于酒精，因此向溶有粗提物的NaCl溶液中加入冷却的体积分数95%的酒精，可获得较纯净的DNA，D正确。故答案为D。 试题2：某同学以菜花为实验材料，进行“DNA的粗提取与鉴定”实验，步骤如下： 步骤一：称取30g菜花，去梗取花，切碎。 步骤二：将碎菜花放入研钵中，倒入10mL研磨液，充分研磨10min。 步骤三：在漏斗中垫上滤纸，将菜花研磨液过滤到烧杯中。在冰箱中放置几分钟，取上清液。 步骤四：将一倍体积的上清液倒入两倍体积的某溶液中，并用玻璃棒缓缓、轻轻地搅拌溶液。将絮状物缠绕在玻璃棒上。 请回答下列问题： （1）请指出并改正该同学实验操作中的错误：? ? ? ? ? ? ?。 （2）步骤二的目的是使菜花细胞破碎，释放DNA，加入研磨液的主要成分有? ? ? ?和? ? ??等。 （3）如要使步骤三所得上清液中杂质减少，可进行? ? ? ??操作后再置于冰箱。 （4）步骤四中所用两倍体积的某溶液为? ? ? ?，需“缓缓、轻轻地”搅拌溶液的原因是? ? ? ??。 （5）简要说明鉴定步骤四所得絮状物是DNA的基本实验设计思路：　　? ? ? ? 　　　　　　　　?。 答案： （1）滤纸应改为纱布