p53非依赖性信号通路在MMS致细胞凋亡中的机制研究的中期报告.docxVIP

p53非依赖性信号通路在MMS致细胞凋亡中的机制研究的中期报告 从中期研究结果来看，我们的研究主要集中在探究p53非依赖性信号通路在MMS（甲基化剂）引起的细胞凋亡中的机制。 首先，我们使用MTT实验和荧光显微镜观察发现MMS能够显著抑制细胞增殖，并且诱导细胞凋亡。然后，我们采用Western blotting技术检测凋亡相关蛋白，在MMS诱导的细胞凋亡过程中，caspase-3, PARP和Bax蛋白的表达水平明显上调，而Bcl-2蛋白下调。这表明细胞凋亡是通过caspase-3介导的凋亡途径发生的。 接着，我们研究了p53以外的信号通路在此过程中的作用。对比发现，p53缺失细胞和具有完整p53的细胞一样，MMS均能够引起细胞凋亡。我们也利用流式细胞术检测发现，与相同浓度的MMS处理相比，p53缺失细胞的凋亡率仅略有下降。这说明p53对MMS诱导的细胞凋亡过程没有重要的作用。 然后，我们开始探索不同的非p53信号通路参与了这一过程。我们选取了NF-κB信号通路、MAPK信号通路和ROS信号通路。结果表明，在MMS处理后，NF-κB和MAPK的检测到的蛋白表达和ROS的水平明显升高。我们采集细胞，借助GFP-NF-κB或GFP-ERK2等标记制成实时显微图像，并发现此过程中确实会触发NF-κB和MAPK信号通路。由于ROS是MMS在生物内发挥作用的方式之一，我们进一步验证了ROS是