CP4-EPSPS溯源用标准蛋白在大肠杆菌中的表达与制备的中期报告.docxVIP

CP4-EPSPS溯源用标准蛋白在大肠杆菌中的表达与制备的中期报告 1.研究背景 CP4-EPSPS是转基因作物中的一种广泛应用的抗除草剂作用的酶，它能够抑制植物体内的5-磷酸-3-羟丙酰乳酸（EPSP）合成，从而达到杀死杂草的效果。由于其广泛应用，CP4-EPSPS已经成为了食品和饲料安全评价的一个重要问题。目前，已经有很多关于CP4-EPSPS的食品安全评价研究，但这些研究大多依赖于CP4-EPSPS的检测方法。而这些方法的关键在于用作标准的CP4-EPSPS蛋白。 2. 研究内容和方法 本次研究的目标是制备用于CP4-EPSPS检测的溯源用标准蛋白。该蛋白在大肠杆菌中表达，并通过Ni-NTA亲和柱纯化、SDS电泳以及Western blot验证。具体方法如下： a.基因克隆：从转基因大豆提取出CP4-EPSPS基因，用PCR扩增并克隆到表达载体中。 b.原核表达：将含有CP4-EPSPS基因的表达载体转化到大肠杆菌E. coli BL21(DE3)中，利用异丙基-β-硫代半乳糖苷（IPTG）进行诱导。 c.蛋白纯化：经诱导24 h后，收集细胞，利用超声破碎法打断其细胞壁，采用Ni-NTA柱进行纯化。 d. 验证：通过SDS电泳得到纯化的蛋白，通过Western blot验证其与预期CP4-EPSPS抗体的结合性。 3. 研究进展 本次研究目前处于中期。已经完成了目标基因的克隆