8.蛋白质的分离纯化.pptxVIP

第 七 章 蛋白质的分离、纯化和表征 ; 研究蛋白质的结构、性质和活性蛋白质的功能，首先需要得到纯的、没有变性的蛋白质样品。 分离和纯化蛋白质的各种方法主要是利用蛋白质之间各种特性的差异，包括： 1.分子的大小和形状、 2.酸碱性质、 3.溶解度、 4.吸附性质 5.对配体分子的特异生物学亲和力。 ;第一节 蛋白质的酸碱性质 ; 蛋白质的等电点; 蛋白质的电泳;电泳;第二节 蛋白质分子大小的测定;常用测定方法：;一、根据化学组成测定最低相对分子质量 ;二、凝胶过滤法测定相对分子质量;;分子筛色谱 （凝胶过滤）;利用Andrews的实验经验式： logMr = a/b—Ve/bVo Ve（elution volume）为某一溶质组分的洗脱体积。它是自加样品开始到该组分的洗脱峰（峰顶）出现时所流出的体积。 V0 (outer volume)为外水体积，即存在于柱床中凝胶珠外孔隙的水相体积。测定出不能被凝胶滞留的大分子溶质如蓝色葡聚糖—2000的洗脱体积可以决定V0。 ;logMr;三、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子质量; 如果在聚丙烯酰胺凝胶系统中加入阴离子去污剂十二烷基硫酸钠(SDS)和少量巯基乙醇，单体蛋白质或亚基的多肽链处于伸展状态，此时SDS以其烃链与蛋白质分子的侧链结合成复合体。结果：1、所有的SDS-蛋白质复合体都具有相同