重叠延伸PCR技术.pptxVIP

重叠延伸PCR技术;1. 重叠延伸PCR技术的概念;2. 重叠延伸PCR技术的原理; 比如有两个基因，一个命名为M，一个命名为N，基因M和N序列如下所示：M的序列为5’-ATGCATGCTAGCTAGAACGCTACGCTGACTACCCCCTGATC-3’N的序列为5’-ATGCTAGTAGCTAGCCCCCCCCAGGGGATAATTTTTTAAAACG-3’ 现在要将它们连接到一起，首先必须要设计引物，假设引物的序列为：M1:5’-ATGCATGCTAGCTAGAACGCT-3’M2:5’-GGGGGGCTAGCTACTAGCATGATCAGGGGGTAGTCAGCGT-3’N1:5’-ACGCTGACTACCCCCTGATCATGCTAGTAGCTAGGGGGGG-3’N2:5’-CGTTTTAAAAAATTATCCCCT-3’ 该过程的目的是将基因M、N通过PCR的方法连接起来，我们观察上面的引物M2和N1，会发现它们要比另外两条引物长很多，为什么要进行这样设计呢？原来这是因为在设计的时候将M2的3’端加入了20个N基因5’端的序列，在N1的5’端加入了20个M基因3’端的序列，然后再进行如下相关步骤：（1）以M1、M2扩增M基因，N1、N2扩增N基因（2）回收M、N基因（3）以M、N为共同的模板，M1和N2为引物，扩增M+N，这样就将M+N拼接起来了。 ;