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表达载体的构建方法及步骤 表达载体的构建方法及步骤 一、载体的选择及如何阅读质粒图谱 目前，载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒 DNA 是一种新的非病毒转基因载体。 一个合格质粒的组成要素： 复制起始位点 Ori 即控制复制起始的位点。原核生物 DNA 分子中只有一个复制起始点。而 真核生物 DNA 分子有多个复制起始位点。 抗生素抗性基因可以便于加以检测，如 Amp+ ,Kan+ 多克隆位点 MCS 克隆携带外源基因片段 P/E 启动子/增强子 Terms 终止信号 加 poly（A）信号可以起到稳定 mRNA 作用 选择载体主要依据构建的目的，同时要考虑载体中应有合适的限制酶切位点。如果构建的目 的是要表达一个特定的基因，则要选择合适的表达载体。载体选择主要考虑下述 3 点： 【1】构建 DNA 重组体的目的，克隆扩增/基因表达，选择合适的克隆载体/ 表达载体。 【2】.载体的类型： （1）克隆载体的克隆能力－据克隆片段大小（大选大，小选小）。如10kb 选 质粒。 ( 2 ) 表达载体据受体细胞类型－原 核／真核／穿，梭E.col／i 哺乳类细胞表达载体。 ( 3 ) 对原核表达载体应该注意： 选择合适的启动子及相应的受体菌，用于表达真核蛋白质时注意克服4 个困难和阅读框错位； 表达天然蛋白质或融合蛋白作为相应载体的参考。 【3】载体 MCS 中的酶切位点数与组成方