人脐静脉血管内皮细胞分离培养与冻存研究.docxVIP

人脐静脉血管内皮细胞分离培养与冻存研究 血管内皮细胞（pvc）的重要功能使外生物化学日益关注。VEC相关疾病病理生理机制的研究,多采用体外培养的原代人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)来进行的。但体外原代培养HUVEC存在细胞数量和使用时间短等局限性,在某些实验应用中而受到限制。本研究采用改良胶原酶灌注消化法对HUVEC的分离培养、传代后冻存、复苏与鉴定进行了实验研究,旨在为获得足够数量和纯度的VEC,并保持其同源同代性提供可靠的方法。 1 材料和方法 1.1 试剂和试剂盒 人脐带由中山大学第一附属医院妇产科提供。CRL-1730 细胞株购于美国ATCC(第35代);ECV304 细胞株由中山大学实验动物中心提供。细胞培养基Human Endthelial-SFM、FBS(胎牛血清)、青霉素+链霉素均为Gibco公司产品;胶原酶Ⅱ型、胰酶、SEGF(血管内皮细胞生长支持物)、DMSO(二甲基亚砜)、甘油为Sigma公司产品;SABC试剂盒购于晶美生物公司、兔抗人Ⅷ因子购于博士德公司、DiI-Ac-LDL购自Molecular Probes公司。生物安全柜(1200 HEAL FORCE,美国),CO2培养箱(HERA Cell,美国),-70 ℃冰箱(FORMA,美国),荧光显微镜(LEICA,DM IRB,德国)等。 1.2 培养基的制备 Cord Buffer缓冲液(脐带保存液