DB1308_T 316-2022 香菇固体转液体菌种生产技术规程.docxVIP

65.020.20 B?05 DB1308 承 德 市 地 方 标 准 DB1308/T?316?—2022 香菇固体转液体菌种生产技术规程 2022-10-31?发布 2022-11-01?实施 承德市市场监督管理局 发?布 DB1308/T?316—2022 前??言 本文件按照?GB/T?1.1-2020?《标准化工作导则?第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由承德市农业农村局归口。 本文件起草单位：平泉市希才应用菌科技发展有限公司。 本文件主要起草人：梁希才、张永峰、柳凤玉、刘海军、王丽波、刘绍苍、梁宏丽、张亚红、张晨 光、孟凡飞、王彦玲、石建军、王帅。 I DB1308/T?316—2022 香菇固体转液体菌种生产技术规程 1?范围 本文件规定了香菇固体转液体菌种生产的前期准备、操作流程以及各步骤的操作方法指示。 本文件适用于香菇固体转液体菌种生产过程管理。 2?规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引 用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修 改单）适用于本文件。 本文件没有规范性引用文件。 3?术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4?前期准备 4.1?培养基 小米谷粒、0.5%食品级甘油、葡萄糖粉、食品级酵母粉、100目豆粕粉、100目玉米粉等。 4.2?仪器设备 高压灭菌锅、超净工作台、液体发酵罐、生化培养箱、摇床、pH酸度计、比重计、打浆机、液体 接种枪、0.9立方塑料桶、50目网筛、750?ml塑料原种瓶、PDA平板培养基、无棉盖体、摇瓶、接种工具 等。 5?操作流程 谷粒选择→谷粒浸泡→滤水→添加石膏→装瓶→灭菌→接菌→菌丝培养→摇瓶→后续养菌→低温 处理→谷粒菌种悬浮液制备→悬浮液过滤→转罐扩大培养→检验→备用。 6?操作方法 6.1?谷粒选择 选择带皮小米谷粒，籽粒饱满、无杂质、直径为0.1?cm～0.15?cm，破碎率控制在2%以内。 6.2?谷粒浸泡 使用塑料桶或箱作为容器，将谷粒倒入容器中，加水浸泡，水与谷粒的体积比为?2:1。环境温度?20℃ １ DB1308/T?316—2022 左右，浸泡?4?h；环境温度?15℃左右，浸泡?10?h；环境温度?10℃左右，浸泡?24?h。以谷粒浸透无白心为 宜。 6.3?滤水 浸泡完成后滤水，将谷粒置于?50?目筛子上进行滤水；以筛底没有水滴滴下，且手抓谷粒不粘手为 宜。 6.4?添加石膏 按照谷粒干重的1%比例添加石膏，搅拌均匀。 6.5?装瓶 选择?750?ml?塑料原种瓶，采用机械或手工装瓶，装料高度至瓶肩；装瓶后的重量在?1.3?kg～1.4kg。 使用无棉盖体扣盖封口，作为培养基。 6.6?灭菌 装瓶后的培养基在4?h内进行灭菌，防止培养基变酸；采用高压灭菌方式灭菌，温度达到121℃时保 持4?h，确保灭菌彻底。 6.7?接菌 灭菌完成后，待培养基温度降到25℃左右时在超净工作台无菌的条件下进行接菌，每支20?mm×200 mm的斜面试管PDA培养基母种转接4瓶培养基。 6.8?菌丝培养 接菌完成后，在培养温度为22℃，空气相对湿度为60%，二氧化碳浓度不超过0.2%的条件下进行培 养。 6.9?摇瓶 当菌丝长到培养基1/4左右时进行摇瓶，使得长有菌丝部分的培养基与没长菌丝的培养基再次混合， 以加快菌种的生长速度。 6.10?后续养菌 待培养基中长满菌丝后，继续培养10?d～12?d，令菌丝长入培养基内部，充分分解谷粒培养基，使 谷粒充分软化，培养成为谷粒原种。该阶段的管理要加强通风换气，二氧化碳浓度不要高于0.15%。 6.11?低温处理 将长好菌丝的谷粒菌种在4℃环境下放置6?h。 6.12?谷粒菌种悬浮液制备 在无菌的条件下，使用打浆机对低温处理的谷粒菌种进行充分破碎，在破碎过程中加入温度为4℃ 的0.5%的无菌甘油溶液，使破碎后的谷粒菌种变成悬浮浆液，其中谷粒菌种与甘油溶液的体积比为1:1。 打浆机对谷粒菌种进行破碎时采用间歇模式，每旋转30?s停顿10?s，以旋转10次为限，防止打浆过程中 温度升高。 ２ DB1308/T?316—2022 6.13?悬浮液过滤 三角瓶消毒，安装消毒后的50目筛片，打浆结束后倒入三角瓶中过滤。 6.14?转罐扩大培养 在无菌条件下，将过滤后的谷粒菌种悬浮液转入到盛装培养液的液体发酵罐中进行液体发酵培养， 悬浮浆液与培养液的体积比为1:1200。发酵罐培养液成分按质量配比为：玉米粉2%、豆粕粉2%、葡萄 糖1.5%、酵母粉0.5%和94%的无菌水。发酵罐内培养条件为温度25℃，罐内压力0.01兆帕，培养6?d。 6.15?检验 6.15.1?取样 在扩大培养即将结束时检