DB1308_T 314-2022 羊肚菌液体菌种生产技术规程.docxVIP

65.020.20 B?05 DB1308 承 德 市 地 方 标 准 DB1308/T?314?—2022 羊肚菌液体菌种生产技术规程 2022-10-31?发布 2022-11-01?实施 承德市市场监督管理局 发?布 DB1308/T?314—2022 前??言 本文件按照?GB/T?1.1-2020?《标准化工作导则?第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由承德市农业农村局归口。 本文件起草单位：平泉市希才应用菌科技发展有限公司。 本文件主要起草人：梁晓生、刘海军、柳凤玉、李大港、张晨光、梁希才、梁宏丽、孙彦平、孟凡 飞、刘绍苍、王彦玲、王帅。 I DB1308/T?314—2022 羊肚菌液体菌种生产技术规程 1?范围 本文件规定了羊肚菌液体菌种生产的生产环境、前期准备、操作流程以及各步骤的操作方法指示。 本文件适用于羊肚菌液体菌种生产的过程管理。 2?规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引 用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修 改单）适用于本文件。 本文件没有规范性引用文件。 3?术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4?生产环境 生产车间环境整洁，通风良好，温度20℃～23℃，符合安全生产需求。 5?前期准备 5.1?制种设备 由无菌空气过滤系统、温度控制系统、冷却系统、停电保护装置、耐高压罐体等组成。 5.2?其他设备工具 发酵罐、高压灭菌锅﹑磁力搅拌机、电磁炉﹑显微镜、摇床、电子秤、玻璃杯、500?ml三角瓶﹑1?000 ml烧杯﹑玻璃棒、磁力搅拌子、棉塞、小勺﹑刀、菜板、牛皮纸、绳、pH试纸等。 5.3?原料 新鲜土豆﹑葡萄糖粉﹑化学纯磷酸二氢钾﹑化学纯硫酸镁﹑化学纯蛋白胨﹑琼脂粉、100目豆粕粉、 食品级消泡剂等。 6?操作流程 母种扩繁培养液制作→发酵罐准备→原种制作→检验→备用。 7?操作方法 １ 150?ml，加入1颗磁力搅拌子，加棉塞后再包扎牛皮纸封口。在1.5?kg/cm?压力（121℃）下灭菌30 150?ml，加入1颗磁力搅拌子，加棉塞后再包扎牛皮纸封口。在1.5?kg/cm?压力（121℃）下灭菌30?min， 取出冷却到30℃以下时，接入一块约2?cm?的斜面母种或6～10块2?mm?的斜面母种。于23℃～25℃下静 7.1?母种扩繁培养液制作 用烧杯量取1?000?ml水，放电炉上烧开，依次将豆粕5?g、葡萄糖20?g、磷酸二氢钾3?g、硫酸镁1.5?g 倒入烧杯中，用玻璃棒不断搅拌均匀，使其完全溶解。培养液配制好后，装入500?ml三角瓶中，每瓶装 2 2 2 置培养48?h，再置放到复式摇床上振荡培养，振荡频率为80～100次/min，振幅6?cm～10?cm。如果用旋 转式摇床，振荡频率为200～220转/min。摇床室温控制在24℃～25℃，一般7?d左右，达到培养液清澈透 明，液中悬浮着大量小菌丝球，并伴有相关菇类特有的香味为宜。 7.2?发酵罐准备 7.2.1?清理 发酵罐在使用之前和使用之后都要进行彻底的清洗，洗罐水由罐底排污管道排出。清洁的标准为罐 内壁无悬挂物，无残留菌球，排放的水清澈无污物。清洗完毕后，检查发酵罐的各个部件和控制系统， 合格后方能开始工作。 7.2.2?灭菌和使用 对于新的发酵罐、染菌的发酵罐、长时间不用的发酵罐要进行空消。首先关闭所有阀门，打开电源 开关，将灭菌开关旋至开，打开蒸汽至罐内部线路所有开关，打开过滤器灭菌线路所有开关，空消压力 0.1Mpa，温度119℃，时间30?min。空消结束后，将灭菌开关关闭，逆行关闭过滤器灭菌线路开关和蒸 汽线路开关，打开排气线路开关，降压后开罐使用。 7.3?原种制作 7.3.1?预热 加水至视镜下方第一颗螺钉平齐处，打开灭菌开关和夹层进出蒸汽线路开关，进行预热，每隔10?min 打开进气开关搅拌1?min，预热至80℃时开始配料。 7.3.2?配料 称取葡萄糖7.5?kg﹑豆粕粉1.5kg﹑酵母膏1.5kg﹑磷酸二氢钾500g、硫酸镁250g﹑消泡剂600?ml~800 ml。将除消泡剂外的原料用罐内热水溶解后加入加料罐，吹入高温气体搅拌均匀。等罐内水温达到90℃ 后便可加料。用压力将混合均匀的营养料加入罐内，最后加入消泡剂。 7.3.3?灭菌 将夹层蒸汽开关关闭，打开罐内蒸汽开关。将过滤器灭菌线路开关打开，开始升温灭菌。灭菌温度 为119℃，压力0.1Mpa，时间60?min。灭菌结束后将蒸汽开关和过滤器灭菌线路开关关闭。 7.3.4?冷却 打开排气线路开关自动降压至罐内压力为0.03?Mpa左右时，打开进气阀门，并打开自来水和冷却进 排管路的开关，开始降温，直至降温到