硫氧还蛋白过氧化物酶活性测定试剂盒说明书.docx

货号：MS1203 规格：100管/96样 硫氧还蛋白过氧化物酶（TPX ）活性测定试剂盒说明书 微量法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： TPX属于过氧化物酶家族，在体内主要通过还原过氧化氢和一些氢过氧化物来实现抗氧化 作用，功能与GPX类似，也是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一°TPX普遍存在于各种生物体内， 如酵母、植物、动物、原生动物、寄生虫、细菌和古细菌，在进化上高度保守。TPX与细胞增 殖、分化、细胞凋亡及肿瘤发生调控密切相关。TPX的主要功能包括细胞脱毒、抗氧化和调节 由过氧化氢介导的信号转导和免疫反应。 测定原理： TPX催化HO氧化二硫苏糖醇（DTT），HO的吸收波长为240nm，通过测定240nm吸光度的 下降速率，通过对照减去过氧化氢酶（CAT）催化分解的H2O2，即可计算出TPX活性。因此，本 试剂盒可以同时测定样品TPX和CAT活性。 2 2 自备仪器和用品： 低温离心机、水浴锅、可调节移液器、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板 （UV板）、和蒸馏水 试剂组成和配制： 试剂一：液体X1瓶，室温保存。 试剂二：液体X1瓶，-20°C保存。 试剂三：液体X1支，4C。 粗酶液提取： 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为1： 5~10的比例（建议称取约0.1g组织， 加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4C离心 10min，取上清置冰上待测。 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000： 1的比例（建议500 万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）； 然后8000g，4C,离心 10min，取上清置于冰上待测。 血清等液体：直接测定。 TPX测定操作： 分光光度/酶标仪计预热30min，调节波长到240nm，蒸馏水调零。 试剂一和试剂二置于25C（一般物种）或者37C（哺乳动物）水浴预热30min。 CAT活性测定管：取微量石英比色皿或96孔板，加入4^ L上清液，180^ L试剂一，16p L试 剂三，迅速混匀后于240nm测定10s和130s吸光度，记为A1和A2。 总活性测定管：取取微量石英比色皿或96孔板，加入4^ L上清液，180^ L试剂二，16p试 剂三，迅速混匀后于240nm测定10s和130s吸光度，记为A3和A4。 注意：每个样品都需要做对照管，以减去过氧化氢酶（CAT ）催化降解的HQ。 TPX活性计算公式： a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下 .按蛋白浓度计算 活性单位定义：25°C或者37°C中，每毫克蛋白每分钟催化Inmol H2O2降解为1个酶活单位。 CAT活性(nmol/min/mg prot) =(A1—A2)：￡ :dXV 反总：(CprXV 样)：T 二573X (A1—A2)：Cpr 总活性(nmol/min/mg prot) = (A3—A4)：￡ :dXV 反总：(CprXV 样)：T =573X (A3—A4)：Cpr TPX 活性(nmol/min/mg prot)二总活性一CAT 活性 .按样本质量计算 活性单位定义：25C或者37C中，每克样本每分钟催化Inmol HO降解为1个酶活单位。 CAT活性(nmol/min/g) =(A1—A2)：￡ :dXV 反总：(WXV 样2V 样总)：T =573 X (A1—A2)：W 总活性(nmol/min/g) = (A3—A4)：￡ :dXV 反总-F (WXV 样：V 样总)：T =573 X (A3—A4) FW TPX活性(nmol/min /g)二总活性一CAT活性 按细胞数量计算 活性单位定义：25C或者37C中，每104个细胞每分钟催化Inmol H2O2降解为1个酶活单位。 CAT 活性(nmol/min/104cell) =(A1—A2) F￡ FdXV 反总F(细胞数量XV 样FV 样总) FT=573X (A1—A2):细胞数量 总活性(nmol/min/104cell) = (A3—A4)F￡ FdXV 反总F(细胞数量XV 样FV 样总) FT=573X (A3—A4):细胞数量 TPX 活性(nmol/min/104cell)二总活性一CAT 活性 按液体体积计算 活性单位定义：25C或者37C中，每毫升液体每分钟催化1nmol H2O2降解为1个酶活单位。 CAT 活性(nmol/min/mL) =(A1—A2) F￡ FdXV 反总FV 样FT 2 2 =573 X (A1—A2) 总活性(nmol/min/mL) = (A3—A4)Fs FdXV 反总FV 样FT =573 X (A3—A4) TPX活性(nmol/