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神经干细胞的培养鉴定

及分化

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神经干细胞的培养鉴定及分化

朱琼1,皋月娟2,高顺记1,陈重1,刘政1,徐亚丽1（1解放军第三军医大学第二附属医院超声科，重庆市400037；2解放军第三。二医院超声科，北京市100039）

引用本文：朱琼，皋月娟，高顺记，陈重，刘政，徐亚丽.神经干细胞的培养鉴定及分化仞.中国组织工程研究，2017,

21（17）:2708-2713.

DOI: ORCID:0000-0002-1810-5009（朱琼）

文章快速阅读:

神经干细胞生物学特征及鉴定

形态结构神经干细胞—生长状态

形态结构

神经干细胞—生长状态

鉴定

」诱导分化

透射电镜观察超微结构

MTT法绘制生长曲线

免疫荧光检测Nestin蛋白表达

流式细胞技术检测细胞周期

免疫荧光检测GFAP、pm-tubulin,MBP表达

文题释义：

神经干细胞：是具有自我更新和多向分化潜能的原始细胞，主要存在于侧脑室下区和海马齿状回颗粒下层，不仅能分化为多种类型的神经细胞替代缺失神经组织，同时能产生多种细胞因子，如脑源性神经营养因子、神经生长因子及胶质源性神经营养因子等，并促进突触发生，调节其可塑性，且能重建部分环路和功能，是神经元替代治疗的理想靶细胞。

细胞分化：指同一来源的细胞逐渐由全能到多能，最后到单能，从而产生形态功能不同的细胞群的过程，其本质是基因组在时间和空间上的选择性表达。如神经干细胞能分化为多种类型神经细胞：星形胶质细胞、小胶质细胞及神经元。同时该过程受局部微环境调节，多种理化因素都能诱导全能细胞产生分化，如血清诱导神经干细胞分化。

摘要

背景：神经干细胞在神经损伤修复和退行性疾病中有广泛的应用前景，体外培养鉴定及促神经元诱导分化是后续研究的基础。

目的：采用悬浮神经球培养法分离培养神经干细胞并对其鉴定，了解生物学特性。

方法：采用悬浮神经球培养法从C57BL/6胎鼠大脑半球分离培养神经干细胞，观察形态特征及超微结构，CCK-8法绘制生长曲线，流式细胞仪检测细胞周期，免疫荧光法检测特异性标志蛋白Nestin的表达；用体积分数为1%和10%的血清诱导分化后，免疫荧光法检测GFAP、pm-tubulin和MBP的表达。

结果与结论：①体外培养得到悬浮生长的神经球，生长曲线和细胞周期表明细胞增殖力强；②透射电镜观察到神经干细胞核浆比高，呈未分化状态；③Nestin免疫荧光阳性；④不同体积分数的血清诱导后均可分化为星形胶质细胞、神经元和少突胶质细胞，体积分数为1%血清能诱导分化得到更多的神经元细胞；⑤结果表明，采用悬浮神经球培养法成功分离培养得到了神经干细胞，低体积分数血清有利于神经干细胞向神经元分化。

关键词：

干细胞；分化；神经干细胞；培养；鉴定；血清；诱导分化；国家自然科学基金

主题词：

神经干细胞；细胞培养的；血清；细胞分化；组织工程

基金资助：

国家自然科学基金面上项目）；全军医学科技青年培育计坳6QNP102）

Cultivation,identificationanddifferentiationofneuralstemcells

ZhuQiong1,HaoYue-juan2,GaoShun-ji1,ChenZhong1,LiuZheng1,XuYa-li1(〔DepartmentofUltrasound,SecondAffiliateHospitalofThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400037,China；2DepartmentofUltrasound,the302ndHospitalofPLA,Beijing100039,China)

朱琼，女，

朱琼，女，1990年生，重庆市人，汉族，2009年第三军医大学毕业，在读硕士，主要从事神经干细胞治疗阿尔茨海默病的作用及机制研究。

通讯作者：徐亚丽，博士，副主任医师，副教授，解放军第三军医大学第二附属医院超声科，重庆市

400037

Abstract

BACKGROUND:Neuralstemcelltransplantationisanemergingtherapeuticoptionintherecoveryofneurallesionsandneurodegenerativediseases.Neuralstemcellcultureanddifferentiationlayafoundationforthefurtherst