5多糖分子量测定解析.pptx

多糖的分子量测定是研究多糖性质的一项较为重要的工作。多糖的性质往往与它的分子量大小有关。例如，多糖溶液的粘度不但随浓度的增大而升高，而且与多糖分子量大小有关。一般说来，分子量增大，粘度增高。;由于不同分子量大小的多糖具有不同的性质，在多糖的应用中，如以其作为试剂使用于某些实验时，往往需要在它的分子量大小方面作选择。可见,不论在多糖性质的研究，或是在它的用途等方面，都涉及分子量方面的问题，往往需要测定它的分子量。因而测定分子量成为研究和制备多糖的一项经常性工作。;测定多糖分子量时，为了避免因存在杂质而影响测定结果，需要把检测的样品(简称样品或检样)适当提纯。用于分子量测定的样品，纯度要求虽然不十分高，但至少要达到:

(1)去除杂质和水分。;一、 透压法：;因 n=W/M， W=CV,;膜渗透压计示意图;[操作]

以右旋糖酐分子量的测定为例。

仪器准备：将脱气后的蒸馏水充满下池。浸泡好的半透膜覆盖其上并注意勿使气泡进入。将上池压紧。按操作要求逐步旋紧中心螺丝(约8小时)，装上针阀及校正杯进行仪器校正(约12小时)，取下针形阀及校正杯，装上进样管，用溶剂充分冲洗后，开动记录仪，划出基线(约12小时)。

样品准备：每一测定的样品需配3～5个不同浓度的溶液。本试验中用右旋糖酐配制成O.209g／100mL(C1)，O.403g／100mL(C2)及O.626g／lOOmL(C3)3种浓度的溶液。

样品测定：先用浓度为C1的样品由进样管注入上池，清洗3次，再注满进行测量，直到记录仪达到平衡。划出的直线与基线之间的距离即为该浓度溶液的π值。

同法测定C2，C3溶液的π值。;第六章 多糖的分子量测定;二、端基法;下面介绍几种常用的测定多糖还原端基的定量分析方法:3，5一二硝基水杨酸比色法

本方法在还原糖与3，5一二硝基水杨酸反应时，产生颜色。;(2)用同样方法，取试剂15mL放人试管，经保温，待冷却到室温后，移人容量瓶加水到50mL，作为对照溶液。比色时用500nm滤光板。;碱性铜盐试剂反应滴定法：

以碱性铜盐试剂氧化还原糖方法，测定多糖端基的半缩醛基团;[操作]

精确称取样品1～2g，用蒸馏水溶解后，配制成50mL，吸取两??5mL分别置于两只容量为100mL具磨砂口的三角烧瓶。

另取一只100mL具磨砂口的三角烧瓶，盛放5mL蒸馏水，作滴定对照用。

向三角烧瓶中分别加入碱性铜盐试剂5mL，然后接上具磨砂接头的冷凝管，放入正在沸腾的水浴中，煮沸30分钟之后，小心地把它们从水浴取出，取时勿使瓶中溶液搅动，待冷至室温后，于各瓶中精确量加O.01mol／L的碘酸钾溶液15mL，再加2．5％的碘化钾溶液1mL(须沿瓶壁加入，使沾在瓶壁上的反应液淋洗入瓶中，加液时勿使反应液搅动，避免受空气氧化)，再加1mol／L的H2S041．5mL，加毕后立即搅拌混匀，然后加1％可溶性淀粉lmL为指示剂，用O．0025mol/l的硫代硫酸钠溶液滴定至蓝色退去为止。;;第六章 多糖的分子量测定;[操作];五、分子筛法;Kav为分配系数，表示物质在流动相(凝胶珠外的液体)和固定相(包括凝胶内的液体和凝胶本身)之间的分配比，则有:

Kav=(Ve-Vo)/(Vt-V0),;[操作];六、超过滤法

超过滤是在常规微粒过滤基础上发展起来的细微粒子过滤新技术，是膜法分离的一种。;[实例]

应用Amicon公司生产Amicon超过滤器(ModelMMC，8Chambers)和超过滤膜PM-10(分子量截留值10000)，XM-50(分子量截留值50000)，XM-110A(分子量截留值100000)测定香菇菌丝多糖的近似分子量：

从人工培养的香菇菌丝提取的多糖是甘露聚糖.粗制多糖经Ect纤维素柱层析和柱层析纯化的精制得到多糖KS-2.为测定KS-2的分子量.步骤如下:

将已知分子量的各种多糖溶于水或O.15mol／LNaCl(溶于0.01mol／L，pH7.2的磷酸盐缓冲液中)，制成浓度为100μg／mL或200μg／mL。

各取5mL置Amicon超过滤器中超滤，收集2.5mL，取O.5mL

测糖含量，比较滤前及滤后的糖含量，算出百分滤过量(三次平均值)。;(3)以百分滤过量对分子量作图得出三种膜的三条标准曲线图7—1超过滤测;(4)再用KS-2在三种膜上和相同测定条件下进行超滤，结果PM-10、XM-50膜基本上完全截留KS-2，而XM-110A膜适合于KS-2的分子量测定。;七、高效液相色谱法测定多糖分子量;[仪器和试剂]

高效液相色谱仪，示差折光检测仪(日本ShodexRISE-51)，色谱柱(Bio-GelTSK-40，TSK-50)，

积分仪(Water