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职业暴露人群血清中多环芳烃的测定

高效液相色谱法

1范围

本标准规定了职业暴露人群血清中15种多环芳烃的高效液相色谱测定方法。

本标准适用于血清中萘、苊、芴、菲、蒽、荧蒽、芘、苯并[a]蒽、屈、苯并[b]荧蒽、苯并[k]荧

蒽、苯并[a]芘、二苯并[a,h]蒽、苯并[g,h,i]苝、茚并[1,2,3-cd]芘15种多环芳烃的检测，可用于内

暴露水平监测及职业暴露人群血清中多环芳烃检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T16631-2008高效液相色谱法通则

GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

血清样品经乙腈萃取冷冻沉淀蛋白，高速离心后取上清液，用高效液相色谱串联荧光检测器进行测

定，外标法定量。

5试剂与材料

5.1试剂

5.1.1水：GB/T6682所规定的一级水。

5.1.2乙腈（CHCN）：质谱纯。

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5.2标准品

多环芳烃标准溶液（含萘、苊、芴、菲、蒽、荧蒽、芘、苯并[a]蒽、屈、苯并[b]荧蒽、苯并[k]

荧蒽、苯并[a]芘、二苯并[a,h]蒽、苯并[g,h,i]苝、茚并[1,2,3-cd]芘）：浓度1000μg/mL，或经国

家认证并授予标准物质证书的标准溶液，-18℃下避光保存。标准品信息参见附录A。

警告——多环芳烃是已知致癌、致畸、致突变的物质，并且致癌性随着苯环数的增加而增加。进行

标准溶液配制等操作时应特别注意安全防护，应在通风柜中操作，尽量减少暴露。

5.3标准溶液制备

5.3.1多环芳烃标准中间液（10.0μg/mL）：吸取多环芳烃标准溶液（1000μg/mL）0.10mL于10mL

容量瓶中，用乙腈定容至刻度，混匀，将溶液转移至棕色玻璃瓶中，-18℃下避光保存，保存期1个月。

5.3.2多环芳烃标准使用液（100ng/mL）：吸取多环芳烃标准中间液（10.0μg/mL）0.10mL于10mL

容量瓶中，用乙腈定容至刻度，混匀，将溶液转移至棕色玻璃瓶中，-18℃下避光保存，保存期7天。

5.3.3多环芳烃标准系列工作液：分别吸取多环芳烃标准使用液（100ng/mL）0.10mL、0.25mL、0.50

mL、1.0mL、1.5mL、2.5mL，用乙腈定容至10mL，得到质量浓度为1.0ng/mL、2.5ng/mL、5.0ng/mL、

3

10.0ng/mL、15.0ng/mL、25.0ng/mL的标准系列工作液，临用现配。

实验所需的玻璃仪器均需在450℃煅烧6h，以消除背景干扰。

6仪器和设备

6.1高效液相色谱仪：配荧光检测器。

6.2涡旋混合器：转速不低于3000r/min。

6.3低温离心机：转速不低于10000r/min。

6.4移液器：量程10μL～100μL和100μL～1000μL。

7试样的制备与保存

7.1试样的制备

取适量新鲜或解冻的空白或供试血清，混合均匀。

a)取混匀后的供试样品，作为供试试样；

b)取混匀后的空白样品，作为空白试样。

在处理样本时，应严格遵从对潜在生物传染性样本处理的相关规定，使用时遵循生物安全规则，并

根据规定对废物进行处理。

7.2样本用量

一般用量为0.1mL～1.0mL，为保证取样的准确性和操作可行性，最小取样量不宜低于0.1mL。

7.3试料的保存

-70℃以下保存，不可反复冻融。

8分析步骤

8.1提取

血清样品室温解冻后，用移液枪准确移取试样100μL置于1.5mL离心管中，加入300μL乙腈，涡

旋2min，-20℃冷冻2h沉淀蛋白，10000r/min低温离心5min，取上清液，供高效液相色谱测定。

8.2测定

8.2.1液相色谱参考条件