《健康人（异体）免疫细胞CIK的制备和临床技术规程》征求意见稿.docx

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健康人（异体）免疫细胞（CIK）的制备和应用技术规程

1.适用范围

本文件适用于在有资质的医师指导下，在正规的医疗机构内，对肿瘤患者，特别是常规治疗失败后，复发转移的晚期肿瘤患者的治疗；以及肿瘤患者常规治疗后预防肿瘤

复发和转移。

2.规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于

本文件。

《中华人民共和国药品管理法》-2019年8月26日修订

国家卫健委科教司《体细胞临床研究工作指引（试行）》的通知-2023-08-18

T/CGCPU019—2022《免疫细胞产品供者材料管理要求》

3.术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1免疫细胞产品immunecellproduct,经过体外分离、培养、扩增后制成的，应用于临床

研究的人源活免疫细胞

3.2供者donor,用于免疫细胞产品（3.1）采集、制备,收获细胞的源是健康人.

3.3供者材料donormaterials,从符合筛查标准的供者（3.2）获得的用于免疫细胞产品

（3.1）生产的免疫细胞。

3.4生物安全biosafety,人类生命健康和生态系统相对处于没有危险和不受生物因子及相

关因素威胁的状态.

4.细胞培养常规技术资料

4.1清洗与消毒

4.1.1玻璃器皿的清洗

清水浸泡——洗衣粉刷洗——自来水冲洗——晾干，浸酸过夜——自来水冲洗10次

以上——蒸馏水洗2-3次——烘干，包装——灭菌，贮存备用。

4.1.2培养板的清洗

3

用后立即浸入水中——洗衣粉清洗——自来水冲洗——晾干，浸酸(强酸)过夜——自来水冲洗10次以上——蒸馏水洗2-3次——烘干，浸入70%乙醇（盖盖以防乙醇挥发。临用前取

出，在空气中干燥，置干净盒内备用。

*注不宜用毛刷刷洗，如残留有附着物，可用脱脂棉蘸水拭掉，流水冲洗干净。

4.1.3载玻片的洗涤

新玻片：自来水冲洗——晾干，洗液中浸泡数小时——流水冲洗数小时——蒸馏水冲洗

数遍——浸入70%乙醇（盖盖以防乙醇挥发）。临用前取出，在空气中干燥，置盒内备用。

旧玻片：肥皂水煮沸——温肥皂水洗——流水冲洗——晾干，洗液中浸泡数小时——流水冲洗——蒸馏水冲洗数遍——浸入70%乙醇（盖盖以防乙醇挥发）。临用前取出，在空气中

干燥，置盒内备用。

*注意不要彼此紧贴在一起

4.1.4胶塞的清洗

自来水浸泡——2%NaOH煮沸10~20分钟——自来水冲洗——1%稀HCl浸泡30分钟——

自来水冲洗——蒸馏水冲洗2~3次——晾干，备用。

4.2灭菌

[原理]使用电热手提式压力蒸汽灭菌器，利用在密闭容器内加热，水就能生成压力蒸汽，蒸汽的温度随着压力的增高而上升，具有良好的穿透性，能使容器内的物品迅速潮润和加热

的原理，使微生物迅速被杀灭，最终达到灭菌的效果。

[方法]

4.2.1使用前，先检查主体内水位是否超过电热管。

4.2.2在加热开始时，放气阀垂直，使空气随加热由桶内逸出。待有较急的蒸汽喷出时，即

将放气阀拨回水平位置。

4.2.3瓶皿121-126℃15min;器械121-126℃10min;橡胶121℃15min;溶液121-126℃

20-40min

4.2.4当压力到达所需的范围时，开始计算时间。124-126℃灭菌时，安全阀能使之维持恒

压；低于124℃时，则应在蒸汽压力到达所需范围时，适当调节开关使之维持恒压。

4.2.5灭菌完，要迅速使之干燥者，将灭菌器内的蒸汽通过放气阀迅速排出。等压力为0时，再稍等1-2分钟，然后将盖打开，继续加热10-15分钟，使物品上残留的水蒸汽得到蒸发，随后关掉；灭菌液体时，应将液体灌装在玻璃瓶中，以不超过3/4体积为好，

瓶口用棉花纱布塞好，并用绳子扎在瓶颈上，使瓶内的空气能自然泄出，而又不致使

4

瓶塞落入瓶内。灭菌完，先关电源，等压力为0时，再稍等几分钟，打开放气阀，排

出余气后，才能将盖开启。

4.3溶液配制

4.3.1洗液的配制

重铬酸钾先溶于水中，然后，将浓硫酸缓慢加入。

[强液]重铬酸钾63g浓硫酸1000ml蒸馏水200ml

「常用」重铬酸钾63g溶于800ml蒸馏水,再缓慢加入浓硫酸1000ml.

「本室」重铬酸钾120g：浓硫酸200ml：蒸馏水1000ml

4.3.2培养液的配制

（1）.把干粉加入15-30℃（室温）三蒸水中，缓慢搅拌令之溶解，并将袋中微量粉末冲下。（2）.加NaHCO32.0g/L1640培养液或