如何选择合适地内标进行定量分析.docxVIP

在LC/MS定量过程中，最为广泛使用的方法是：在待测溶液中加入（通常称为加标）精心挑选的化合物（含量已知，且与分析物不同）。此类内标可用于校正仪器漂移或样品进样量变化等影响，或用于测量的内部校准。

在液相色谱-质谱联用仪中，后者通常利用了质谱定量的一大优势，即可以使用同位素标记的内标。为此，有必要获得或合成一种同位素组成不同于目标分析物的分析物类似物。仅同位素组成不同的分子称为同位素，校准方法称为同位素稀释质谱法（IDMS）。在该技术的大多数LC-MS应用中，常使用的同位素是13C、15N或?2H（氘）。

考虑因素

一个重要的决定因素是：何时添加内标。

在许多应用中，内标应尽可能早地添加到分析过程中，例如用于校正样品制备过程中的损失。但在某些应用中，可能需要在稍后阶段添加内标。例如，对于有消解阶段的方法，如果所选的内标是消解后目标化合物的类似物，那么在消解阶段之后添加可能是最合适的。选择非同位素标记的内标时应考虑以下几个方面：

任何要分析的样品中都不应该含有这种物质。例如，使用处方药作为治疗药物监测（TDM)应用的内标就不是一个好主意。

内标物的理化性质应尽可能与目标分析物相似，洗脱时间应尽可能接近目标分析物。

同分异构体、同源物和结构类似物通常是理想的候选物质。

▲图1.内标使用示意图【来源：ProbingProteinGlycationbyChromat