分子生物学学习资料：chapter4.docVIP

4.1参考表4.1内容，确定下列限制性内切酶切口黏性末端（如果存在）的碱基数和种类（5’或3’突出）

答：

编号

限制酶种类

识别序列

黏性末端碱基数

黏性末端种类

a

AluI

AG↓CT

0

无

b

BglII

A↓GATCT

4

5

c

ClaI

AT↓CGAT

2

5

d

KpnI

GGTAC↓C

4

3

e

MboI

↓GATC

4

5

f

PvuI

CGAT↓CG

2

3

g

NotI

GC↓GGCCGC

4

5’

4.2为什么需要将DNA连接到载体上再克隆？

答：首先因为DNA本身在没有外界提供能量、酶等条件时，无法完全靠自己进行复制。所以我们必须将它加入到一个能提供复制条件并不断复制的细胞（或类细胞结构）中，例如细菌、噬菌体。其次，如果单纯的将所要复制的DNA注入到寄主细胞（hostcell）中，他会被认定为外来物质被解体，所以必须要将DNA插入一个载体，以使DNA能在寄主细胞（hostcell）中正常的复制。

4.3试描述将一段DNA片段克隆到质粒pBR322的PstⅠ位点的过程？你怎么检测含有外源DNA的质粒？

答：将一段DNA片段克隆到质粒pBR322的PstⅠ位点的过程：

首先，用PstⅠ位点的限制性内切酶剪切质粒pBR322和外源DNA的PstⅠ位点，使