5.-糖体部分的结构解析.pptxVIP

五、糖体部分的结构解析;;;;;;;一、核磁共振光谱;虽然一些质子的化学位移受温度影响，但通常较小。HOD信号能给低聚糖的谱图带来麻烦，这时调节温度能移开残留的HOD信号以防止它掩盖糖的端基氢。升高温度可使HOD信号向高场移动（在70℃大约在4.5ppm），从而展开多一些谱图。;2.单糖组成和端基构型;3.一维核磁共振谱;3.11H-NMR谱;1H-NMR谱中，没在拥挤区域而分开的信号，即“结构报告信号”，是波谱解析的始点，它能提供明确的化学位移、偶合常数和谱线宽度从而有助于结构解析，这包括端基质子和6-去氧糖的甲基质子。

多数端基质子在4.2~5.3ppm之间，通常α型较β型端基质子低场位移0.3~0.5ppm。化学位移在4.8~5.3ppm之间同时3J1,2双峰在1~4Hz间为α型葡萄糖和半乳糖端基质子，而化学位移在4.4~4.8ppm之间同时3J1,2双峰在6~8Hz间为β型葡萄糖和半乳糖端基质子。;对低聚糖的信号归属可通过与模型化合物特别是与单糖和含糖较少的低聚糖比较而得到，一旦个别信号被归属到一确定糖后，NOE和部分照射可用以帮助确定连接位置和连接顺序，但太大量的重叠信号会使全部信号明确无误地归属产生困难。;3.213C-NMR谱;端基碳在醛糖中是叔碳，在酮糖中是季碳。还原糖的端基碳较成苷糖约向高场位移5~10ppm。还原糖的端基碳通常在90~98ppm，而氧苷连结的端基碳约为98~112ppm，从而可帮助我们判断低聚糖的聚合数。其余次甲基和亚甲基碳通常在51~86ppm间，若次甲基碳在52~57ppm间，一般认为有氨基糖存在，在170~176ppm的低场信号反映出糖醛酸或酰胺基团的存在，酰胺基团可进一步被21~24ppm的酰胺甲基信号所确证。57.7~64.7ppm包含所有6位未取代的亚甲基信号，而6-去氧糖的甲基信号一般位于16~19ppm，若6位取代时亚甲基信号低场位移至66~70ppm处，其余次甲基碳，无论取代与否，都出现在66~85ppm范围内。;在60~70ppm范围内，醛糖拥有一个仲碳，而酮糖拥有两个仲碳，从上述化学位移范围内减去非糖上连氧信号，就可决定单糖的个数。因为多数天然糖类为六碳糖和五碳糖，也就是分别在碳谱中出现6个和5个信号，在60~85ppm中总的碳信号数（除去非糖上碳信号后）除以4或5或两者结合，也可确定单???的个数。因为在这个范围内，六碳糖给出5个信号，而6-去氧糖、6-羧基糖和五碳糖给出4个信号，仔细琢磨这些数据会给出很有价值的信息。;多数α和β型吡喃糖在C-4和C-6的化学位移相近，而C-1、C-2、C-3和C-5的化学位移差别较大，α型较β型相应碳向高场位移2~7ppm。对这一规律有些例外的是甘露糖和鼠李糖，两者C-1化学位移无明显差别，而C-3和C-5的化学位移具有一定的诊断价值，α型糖较β型糖高场位移1.5~3ppm。

呋喃糖的化学位移很有特色[表4]，一般说来，80~85ppm为呋喃醛糖的C-4或呋喃酮糖的C-5。同一单糖的呋喃糖和吡喃糖化学位移区别较大，因而可用以决定氧环的大小。;DEPT和INEPT实验对鉴别糖的种类有一定帮助，如酮糖端基碳为季碳，且有两个仲碳，而醛糖的端基碳都为叔碳，且只有一个仲碳信号，这很容易区别。

虽然碳谱中信号的完全归属较氢谱容易，但也有一些困难，由于天然13C丰度很低，所以没有邻碳偶合常数可借助。通常与组成单糖的碳谱数据和体现了α和β苷化效应的简单低聚糖数据对照而确定归属。;4.二维核磁共振谱;4.1COSY谱;4.2PS-COSY谱;4.3DQF-COSY谱;4.4HOHAHA谱和TOCSY谱;4.5NOESY谱;4.6HMQC谱和HSQC谱;4.7组合式的二维核磁共振谱;28;HMQC-TOCSY谱;HMQC-TOCSY谱;5.糖之间连接顺序和连接位置的确定;5.2苷化位移法;在13C-NMR谱中，苷化位移规律性强一些，苷化使成苷碳低场位移4~10ppm（α效应），相邻碳高场位移0.9~-4.6ppm，两相邻碳不一定相同（β，β′效应），其它碳几乎不受影响。;5.3NOESY和ROESY谱;5.4HMBC谱;6.不同苷元的苷化位移;7.取代基团的连接位置确定;硫酸酯基通常使偕位和邻位质子去屏蔽，偕位仲碳质子通常低场位移约0.4~0.5ppm，叔碳质子低场位移约0.7~0.9ppm。对邻位叔碳质子通常低场位移约0.25±0.05ppm，而对仲碳质子则为0.13±0.05ppm。

硫酸酯基通常使α-C低场位移6~11ppm