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4CL1定点突变与4CL1-CCR融合双功能酶蛋白酶学特性研究的开题报告

标题：4CL1定点突变与4CL1-CCR融合双功能酶蛋白酶学特性研究

背景：

4-羟基香豆素乙醇酰化酶（4-coumarate-CoAligase1，4CL1）催化摄取的香豆素（coumarins）及香草素（cinnamates）与辅酶A（CoA）结合成相应的Acyl-CoA，进而参与苯丙素提供物的合成。CCR（cinnamoyl-CoAreductase）也是巧合在苯丙素途径，对香豆素苯丙烯酸及其余Cinnamoyl酸进行还原。结构上，4CL1和CCR均由C末了端的硫辛酸肽结构域连接N端的核苷酸结合域组成。4CL1是一个单功能酶蛋白，CCR是一个双功能酶蛋白，在苯丙素途径中的作用相似但不同。如何提高4CL1的催化效率，使其表现出CCR的还原功能成为研究热点。

目的：

本研究旨在通过在4CL1的C末了端嵌入具有还原酶活性的氨基酸残基，使其具有CCR的双功能性；并通过融合4CL1核苷酸结合域与CCR，获得4CL1-CCR融合双功能酶蛋白，研究其酶学特性。

方法：

1.通过基因工程技术实现4CL1的定点突变，嵌入具有还原酶活性的氨基酸残基，以获得具有双功能酶活性的4CL1蛋白。

2.融合4CL1的核苷酸结合域与CCR蛋白，以获得4CL1-CCR融合双功能酶蛋白。

3.纯化重组蛋白，并通过比较其催化反应