血清γ球蛋白的分离与纯化.docxVIP

血清Y球蛋白的分离与纯

化

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【一01血清清蛋白的分离与纯化

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【目的要求】

掌握分离纯化蛋白质的基本原理和基本过程。

熟悉盐析、离心、层析、电泳、比色等生物化学基本技术在蛋白质分离纯化中的综合应用。

4.学会设计和制定分离纯化蛋白质的实验方案、技术路线和质量监控和保证措施。

【实验原理】

不同蛋白质的理化性质和生物学性质各有不同，利用这些不同便可获得分离纯化。

血清蛋白有300多种,可粗略分成清、球蛋白两大类，Y球蛋白只是球蛋白中的一个亚类。欲用常规方法获得，可先用半饱和硫酸铵从血清中盐析出球蛋白，接着用葡聚糖凝胶G—25（Sephadex—25）脱去球蛋白中的盐分（硫酸铵），最后用DEAE（二乙基氨基乙基）纤维素阴离子交换柱，便可直接从脱盐的球蛋白溶液中分离纯化出Y球蛋白，其反应机理如下：

h2po

h2po4

纤维素-0ch2）2-n-

纤缝素-O-(CH2)2-N(C2H5)2 1

知盐析和脱盐的球蛋曰演h2po+HDEAE纤维素雷子交换柱口、日、T

知盐析和脱盐的球蛋曰演

h2po+

H

DEAE纤维素雷子交换柱

口、日、T球蛋

被柱层析交换结合的a球蛋白和6球蛋白，可通过增加洗脱液