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稳定表达鸡ST3GALI的MDCK细胞系的建立的开题报告

一、选题背景及意义

鸡ST3GALI是一种在动物胚胎发育中高表达的糖基转移酶，它能够将乳糖基转移至已被糖基化的半乳糖基上，从而促进糖基化水平的提高。随着人们对于糖基化及其在生命过程中的重要作用的认识不断加深，对于ST3GALI的研究也得到了广泛的关注。目前已有研究表明，ST3GALI对于种种生理过程的调控及参与是十分重要的。比如，它能够影响细胞的识别及黏附能力，参与免疫系统的调节，影响神经系统的发育等等。然而，由于其几乎只在胚胎发育期间高表达，因此需要建立稳定表达鸡ST3GALI的细胞系以供后续的研究。

二、研究内容及方法

1.构建ST3GALI的表达质粒：将鸡ST3GALI的全长cDNA克隆到表达载体上，并加入相应的选择标记，使得转染后得到的细胞可以稳定表达该酶。

2.筛选稳定表达细胞系：将上述表达质粒转化到MDCK细胞中，用荧光显微镜来检测是否达到期望效果。将筛选到的阳性细胞分离并根据其表达量的高低进一步挑选。

3.评价鸡ST3GALI在MDCK细胞中的表达：通过Westernblot和RT-PCR等方法来验证所筛选到的细胞中鸡ST3GALI的真实表达情况。

4.评价所构建的稳定表达细胞系：进一步评价所构建的稳定表达细胞系是否具有表达鸡ST3GALI的能力，并初步探究其对于细胞行为和生理过程的影响。